自噬對鎘致大鼠腎小管上皮細胞凋亡的影響及其調(diào)控機制.pdf

1、埸H1大譬YANGZH0UUNIVERSITY學號密級博士學位論文自噬對鎘致大鼠腎小管上皮細胞凋亡的影響及其調(diào)控機制劉剛指導教師姓名：型室鏨蕉：塹叢盤莖：婆菱塹叢：至2三QQ里申請學位級別：監(jiān)一學科專業(yè)名稱：堅鏖?？锴o論文提交日期：2Q12生壘旦。論文答辯日期：2Q!Z生魚旦學位授予單位：塹劌盤芏學位授予日期：2Q!Z主魚旦答辯委員會主席：工壁受塞旦2017年6月劉剛：自噬對鎘致大鼠腎小管上皮細胞凋亡的影響及其調(diào)控機制自噬對鎘致大鼠腎小

2、管上皮細胞凋亡的影響及其調(diào)控機制中文摘要鎘是環(huán)境中常見的高毒性重金屬污染物，急性或慢性鎘暴露能引起多種器官和組織的損傷。近年來，由于工業(yè)生產(chǎn)中鎘生產(chǎn)量和使用量的激增及相關(guān)工業(yè)廢物帶來的污染加重，使得環(huán)境中鎘含量呈快速上升趨勢；鎘在環(huán)境中的半衰期長達lo30年，進入環(huán)境后不能像有機污染物一樣被微生物降解，并且可以通過食物鏈效應(yīng)最終蓄積在人體中。因此，鎘暴露給公眾健康帶來的危害引起了廣泛關(guān)注。腎臟是鎘毒性作用的靶器官，國內(nèi)外學者從環(huán)境污染、

3、職業(yè)性暴露和動物試驗等多等方面對鎘所致腎毒性機理進行了廣泛、深入地研究；但這些研究多集中于凋亡機理的探究，而對鎘所致腎臟毒性過程中自噬的機理、作用及其與凋亡關(guān)系的探究較少。1鎘誘導大鼠腎臟皮質(zhì)和腎小管上皮細胞發(fā)生自噬分為體外和體內(nèi)兩部分。體外試驗采用機械篩網(wǎng)結(jié)合酶消化法建立原代大鼠腎小管上皮細胞(rPTcells)培養(yǎng)模型，在傳一代細胞增殖活性最強時問進行鎘染毒處理，同時選擇NRK52E細胞株進行同樣處理。CCK一8法測定不同濃度的鎘在

4、不同染毒時間對rPT細胞和NRK52E細胞活性的影響；MDC熒光探針法檢測不同濃度的鎘在不同染毒時間對rPT細胞和NRK52E細胞自噬水平的影響；25pM和5pM鎘處理rpT細胞、5uM和10gM鎘處理NRK52E細胞6h，免疫印跡法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3II、p62和Beclin一1表達水平變化。結(jié)果表明，25gM和5gM鎘處理rPT細胞、5gM和10gM鎘處理NRK52E細胞6h，細胞活性最強，自噬水平最高，極顯著高于對照組(火00

5、1)；25gM和5gM鎘處理rPT細胞、5uM和10taM鎘處理NRK52E細胞12h，細胞自噬水平最低，極顯著低于對照組(P001)。體內(nèi)試驗選擇SD大鼠32只，隨機分為4組：對照組(DDW)和鎘組(CdAc2，50mg／kgbw)，飼養(yǎng)l周；對照組(DDW)和鎘組(CdAc2，50mg／kgbw)，飼養(yǎng)8周。取腎臟皮質(zhì)，RTPCR法檢測自噬相關(guān)基因LC3、p62和Beclin1表達量變化；免疫印跡法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3II、p62