survivin基因表達(dá)與脈絡(luò)膜惡性黑色素瘤增殖及凋亡的相關(guān)性研究.pdf

1、脈絡(luò)膜黑色素瘤(choroidalmelanoma)起源于脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞，為成人常見(jiàn)的眼內(nèi)惡性腫瘤，預(yù)后不良，嚴(yán)重地摧殘人們的視功能，并威脅著人們的生命安全。深入地研究該病的病因及發(fā)病機(jī)制，尋求可靠的評(píng)估轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)，對(duì)臨床診療具有重要意義。腫瘤分子生物學(xué)研究揭示細(xì)胞增殖和凋亡失衡是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。近年來(lái)，對(duì)細(xì)胞凋亡抑制的研究已成為分子腫瘤學(xué)的一個(gè)熱點(diǎn)。survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員，其在細(xì)胞周期的G2/M

2、期表達(dá)，可抑制半胱氨酸蛋白酶(caspase3、7)的活性而發(fā)揮抗凋亡功能，也可以調(diào)控細(xì)胞周期，參與血管形成，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。目前survivin在脈絡(luò)膜黑色素瘤中表達(dá)及其與細(xì)胞增殖和凋亡的研究國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)研究報(bào)道。因此，研究survivin在脈絡(luò)膜正常組織及黑色素瘤中的表達(dá)，及其與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡的相關(guān)性，對(duì)闡明survivin在脈絡(luò)膜黑色素瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，為判斷預(yù)后并可能在診斷和治療上的應(yīng)用都有著重要的意

3、義。 目的本課題通過(guò)對(duì)凋亡蛋白抑制因子survivin在脈絡(luò)膜黑色素瘤不同病理特征中的表達(dá)及其與細(xì)胞增殖和凋亡的關(guān)系進(jìn)行研究，初步探討其在脈絡(luò)膜黑色素瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，深入了解脈絡(luò)膜黑色素瘤的生物學(xué)行為，并為脈絡(luò)膜黑色素瘤的早期診斷，判斷預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料和方法1.選擇51例脈絡(luò)膜黑色素瘤標(biāo)本，術(shù)前均未行放療、化療及其它治療，全部組織經(jīng)10％福爾馬林固定，石蠟包埋。所有標(biāo)本重新進(jìn)行HE染色，確

4、定組織病理學(xué)類型。其中梭形細(xì)胞型13例，上皮細(xì)胞型16例，混合細(xì)胞型22例；其中侵犯鞏膜者17例，未侵犯鞏膜者34例；腫瘤最大基底直徑(largesttumordiameter，LTD)≥15mm者16例，LTD＜15mm者35例；局限于脈絡(luò)膜者36例，累及睫狀體者15例。另取10例尸檢眼正常脈絡(luò)膜組織標(biāo)本作為對(duì)照。 2.采用免疫組化鏈霉卵白素生物素復(fù)合物(SP)方法檢測(cè)survivin和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白的表達(dá)，分

5、別計(jì)算survivin免疫反應(yīng)評(píng)分(IRS)和增殖指數(shù)(PI)；采用TUNEL方法原位檢測(cè)脈絡(luò)膜黑色素瘤凋亡細(xì)胞，計(jì)算凋亡指數(shù)(AI)。 3.數(shù)據(jù)分析采用SPSS11.5軟件包完成，survivin的表達(dá)與臨床病理特征間的比較采用χ2檢驗(yàn)、Fisher’s精確概率檢驗(yàn)、方差分析，survivin表達(dá)陽(yáng)性、陰性組間，凋亡指數(shù)、增殖指數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；survivin表達(dá)評(píng)分與AI、PI的關(guān)系采用一元線性相關(guān)分析，取α=0

6、.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果1.survivin在脈絡(luò)膜黑色素瘤及正常脈絡(luò)膜組織中的表達(dá)51例脈絡(luò)膜黑色素瘤組34例survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)(66.67％)，survivin表達(dá)主要定位于脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞胞漿中，為粗細(xì)不一的棕黃色顆粒；10例正常脈絡(luò)膜組織中均未見(jiàn)survivin蛋白陽(yáng)性染色。兩者有非常顯著性差異(P＜0.01)。 2脈絡(luò)膜黑色素瘤中survivin的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系鞏膜受侵組survi

7、vin表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于鞏膜未受侵組，兩者進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，差異有非常顯著意義(P＜0.05)。survivin表達(dá)陽(yáng)性率在梭形細(xì)胞腫瘤、混合型腫瘤及上皮樣細(xì)胞型腫瘤分別為46.2％、59.1％、93.8％，三者進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，差異有顯著意義(P＜0.05)。進(jìn)一步在梭形細(xì)胞型、上皮樣細(xì)胞型及混合型腫瘤之間作兩兩比較，混合型及梭形細(xì)胞型survivin的表達(dá)差異無(wú)顯著性(P=0.38)，但上皮樣細(xì)胞型survivin的表達(dá)均顯著高于前兩者(P

8、＜0.05)。survivin在LTD≥15mm組的表達(dá)陽(yáng)性率為79.2％，高于LTD＜15mm組(55.6％)，腫瘤位置在累及睫狀體組survivin陽(yáng)性表達(dá)率為80.0％，高于單純位于脈絡(luò)膜組(61.1％)，但經(jīng)χ2檢驗(yàn)，survivin表達(dá)與腫瘤最大基底直徑及腫瘤位置之間差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)。 3.凋亡指數(shù)(AI)的測(cè)定以及與survivin表達(dá)的關(guān)系脈絡(luò)膜黑色素瘤無(wú)論分化高低均可見(jiàn)標(biāo)記的凋亡細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞

9、核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。AI范圍是0.61％～17.74％，平均(7.65±4.41)％。在survivin表達(dá)陽(yáng)性的標(biāo)本中AI值為6.22±3.67，顯著低于survivin表達(dá)陰性標(biāo)本中的AI值(10.51±4.46)，二者差異有顯著性(t=3.665，P＜0.05)，經(jīng)直線相關(guān)分析，AI值與survivinIRS呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.652，P＜0.05) 4.增殖指數(shù)(PI)的測(cè)定以及與survivin表達(dá)的關(guān)系本組脈絡(luò)膜

10、黑色素瘤標(biāo)本均有PCNA陽(yáng)性表達(dá)，PCNA陽(yáng)性染色細(xì)胞胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒，PI范圍是3.57％～62.18％，平均(36.93±13.02)％。survivin陽(yáng)性組和陰性組PI分別為(40.4±12.5)％和(29.9±11.4)％，survivin陽(yáng)性組PI明顯高于陰性組PI(t=2.904，P＜0.05)，且差異具顯著性。PI值與survivinIRS呈顯著正相關(guān)(r=0.659，P＜0.05)。 結(jié)論1.survivi

11、n在脈絡(luò)膜黑色素瘤組織中呈高表達(dá)，在正常脈絡(luò)膜組織中未見(jiàn)表達(dá)，是一個(gè)較為特異的腫瘤標(biāo)志物，提示survivin可能與脈絡(luò)膜黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。 2.survivin與脈絡(luò)膜黑色素瘤的細(xì)胞類型及腫瘤浸潤(rùn)程度有明確的相關(guān)性，在一定程度上可以反映其惡性程度和作為預(yù)后的指標(biāo)。 3.TUNEL法測(cè)得的細(xì)胞凋亡指數(shù)是反映腫瘤細(xì)胞的惡性程度，評(píng)價(jià)其生物學(xué)行為的參數(shù)，脈絡(luò)膜黑色素瘤中survivin表達(dá)與凋亡指數(shù)呈負(fù)相關(guān)。