Survivin、PEDF在惡性黑色素瘤中的表達(dá)及其在EGCG誘導(dǎo)A375細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、第一部分 Survivin、PEDF在皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)及臨床意義 目的探討生存素(Survivin)及色素上皮源性因子(PEDF)在皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)及其臨床意義。 方法SP免疫組化法檢測Survivin、PEDF蛋白在48例原發(fā)性皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)水平，以23例色素痣作為對照。 結(jié)果(1)Survivin在皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)明顯強(qiáng)于其在色素痣中的表達(dá)，PEDF在二者中的表達(dá)無明

2、顯差異，(2)Survivin和PEDF蛋白表達(dá)均與惡性黑色素瘤病理學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度及預(yù)后相關(guān)，(3)Survivin在黑色素瘤中的表達(dá)水平與PEDF呈明顯負(fù)相關(guān)。 結(jié)論Survivin與皮膚惡性黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，對皮膚惡性黑色素瘤的輔助診斷及預(yù)后評估具有重要的臨床意義。PEDF在皮膚惡性黑色素瘤發(fā)展過程中可能起負(fù)性調(diào)節(jié)作用。 第二部分 EGCG對惡性黑色素瘤A375細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

3、 目的探討EGCG對黑色素瘤A375細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。 方法對人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375進(jìn)行培養(yǎng)傳代；活細(xì)胞計數(shù)法、MTT試驗檢測EGCG不同濃度和不同時間對A375細(xì)胞生長的抑制作用；用相差顯微鏡、電鏡和Hochest核染色觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；TUNEL法定量檢測細(xì)胞凋亡；用AnnexinV-FITC、PI雙染分析細(xì)胞凋亡的變化；同時用DNA電泳觀察凋亡的生化學(xué)改變。 結(jié)果EGCG可明顯抑制A375細(xì)胞

4、的增殖，其增殖抑制率呈濃度和時間依賴性；細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察到明顯凋亡發(fā)生；TUNEL染色也觀察到凋亡的發(fā)生，且凋亡發(fā)生和藥物濃度、作用時間呈依賴關(guān)系；流式細(xì)胞技術(shù)證實EGCG誘導(dǎo)A375細(xì)胞的早期凋亡顯示出明顯的時間和劑量依賴關(guān)系；DNA電泳亦可觀察到細(xì)胞發(fā)生凋亡的典型DNAladder。 結(jié)論EGCG對黑色素瘤A375細(xì)胞的抑制作用與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡有關(guān)，為進(jìn)一步研究EGCG的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 第三部

5、分 Survivin、PEDF在EGCG誘導(dǎo)A375細(xì)胞凋亡中的作用 目的體外觀察EGCG誘導(dǎo)黑色素瘤細(xì)胞凋亡過程中凋亡相關(guān)蛋白Survivin、PEDF的表達(dá)變化及其與EGCG的增殖抑制、凋亡誘導(dǎo)的關(guān)系，為更深入地研究EGCG的凋亡調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 方法對人黑色素瘤細(xì)胞株A375進(jìn)行培養(yǎng)傳代；運用細(xì)胞免疫組化法檢測不同濃度EGCG作用腫瘤細(xì)胞后Survivin、PEDF蛋白的表達(dá)情況；以western-blo

6、t法檢測不同作用時間EGCG對A375細(xì)胞survivin、PEDF蛋白表達(dá)的影響；以RT-PCR技術(shù)檢測不同濃度EGCG對A375細(xì)胞survivin、PEDFmRNA表達(dá)的影響；同時采用Caspase-3活性檢測試劑盒檢測不同濃度EGCG作用腫瘤細(xì)胞不同時間后的Caspase-3活性。 結(jié)果免疫組化法觀測EGCG作用A375細(xì)胞后，Survivin蛋白的表達(dá)明顯減弱，PEDF蛋白的表達(dá)則明顯增強(qiáng)，且藥物濃度越高，變化越明顯；

7、免疫印跡法檢測顯示Survivin、PEDF蛋白表達(dá)的變化與藥物作用時間呈一定的依賴關(guān)系；RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)SurvivinmRNA表達(dá)水平隨著EGCG作用濃度的增加而下降，PEDFmRNA表達(dá)水平則隨著EGCG作用濃度的增加而增加，SurvivincDNA/β-actineDNA比值與細(xì)胞增殖抑制率和細(xì)胞凋亡率呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01)，PEDF/β-actincDNA比值與細(xì)胞增殖抑制率和細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)(P＜0.01)；Casp