人參果質量標準建立及指紋圖譜研究.pdf

1、人參果為五加科（Araliaceae）人參屬（Panax）植物人參（Panax ginseng C.A.Meyer.）的干燥成熟果實。人參為多年生草本植物，主產于我國東北地區(qū)。目前國內外對人參地下部分的研究報道比較多，但對人參的地上部分研究報道相對來說比較少，特別是對人參果的研究更少，《中國藥典》（2010年版一部）制定并收錄了人參和人參葉的質量標準，但人參果未被收錄。
　　本文建立了人參果的質量標準，分別采用高效液相色譜法（HP

2、LC）和紅外光譜法（IR）建立了人參果的指紋圖譜，并應用表達序列標簽簡單重復序列技術（EST-SSR）對樣品進行了標記，具體研究方法和結果如下：
　　特性研究：主要通過文獻檢索及人參主產地的現(xiàn)場考察對人參果原植物的生長環(huán)境、人參果的采集加工和藥材物理性狀等進行了研究和規(guī)范。
　　質量標準中的檢查項目研究：建立人參果藥材中水分、總灰分、重金屬及有害元素、有機氯農藥殘留量的檢測方法。規(guī)定人參果藥材中水分不得過9％；總灰分不得過7

3、%；鉛不得過百萬分之二；鎘不得過千萬分之二；砷不得過百萬分之二；汞不得過千萬分之二；銅不得過百萬分之二十；人參果藥材中有機氯農藥殘留量六六六（總BHC）不得過千萬分之一；滴滴涕（總DDT）不得過百萬分之一；五氯硝基苯（PCNB）不得過千萬分之一。按上述方法對10批人參果藥材進行了檢測，結果均符合規(guī)定。
　　定性鑒別研究：采用薄層層析鑒別法（TLC）建立了人參果中人參皂苷Re、Rg1和Rb1的鑒別方法，結果供試品色譜中，在與對照品色

4、譜相應的位置處，顯相同顏色的斑點。
　　含量測定研究：采用紫外-可見分光光度法建立人參果中人參總皂苷的含量測定方法，10批樣品中人參總皂苷的平均含量為14.77%，限定人參果按干燥品計算，含人參總皂苷以人參皂苷Re計，不得少于12%。采用高效液相色譜法（HPLC）建立人參果藥材中人參皂苷Re和Rd的含量測定方法，10批樣品中人參皂苷Re的平均含量為4.5%，人參皂苷Rd的平均含量為2.5%，限定人參果按干燥品計算，含人參皂苷Re不

5、得少于3.5%，含人參皂苷Rd不得少于1.6%。
　　HPLC指紋圖譜研究：采用Agilent C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）， 流動相為乙腈-0.05％磷酸水溶液梯度洗脫，流速1.0 ml/min，檢測波長203 nm，柱溫為35℃。結果確定了7個特征峰為共有峰，建立了特征峰的共有模式，并指認出全部共有峰成分，分別為人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rc、Rb2和Rd。利用中藥色譜指紋圖譜相似度

6、分析軟件，對10批樣品進行HPLC指紋圖譜分析，計算相似度，結果顯示其中8批樣品的相似度在0.97以上。
　　紅外指紋圖譜研究：利用紅外色譜法建立了人參果指紋圖譜，分析發(fā)現(xiàn)10批不同產地的人參果提取物具有相似的化學成分，其中在2000 cm-1左右處，均有明顯的特征峰，可作為人參果進行定性鑒別依據。
　　DNA指紋圖譜研究：應用EST-SSR技術對10批人參樣品進行標記，從26對EST引物中篩選出18對具有多態(tài)性的引物，在1

7、0個人參樣品中在165個位點上擴增出條帶，平均每對引物有7.94個擴增位點，其中多態(tài)性位點127個，多態(tài)率為76.97％。結果表明不同產地的人參存在遺傳差異，相同產地的樣品親緣關系較近。
　　綜上，本課題首次對吉林省典型道地藥材人參果進行了系統(tǒng)的質量標準研究以及指紋圖譜的研究，系統(tǒng)地對人參果特性及質量的各項指標進行了測定和規(guī)范，為人參果的質量評價和控制提供了全面、科學、有效的方法和依據，進而為人參果相關產品的開發(fā)，提高人參藥材附加