人參果質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立及指紋圖譜研究.pdf

1、人參果為五加科（Araliaceae）人參屬（Panax）植物人參（Panax ginseng C.A.Meyer.）的干燥成熟果實(shí)。人參為多年生草本植物，主產(chǎn)于我國(guó)東北地區(qū)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)人參地下部分的研究報(bào)道比較多，但對(duì)人參的地上部分研究報(bào)道相對(duì)來說比較少，特別是對(duì)人參果的研究更少，《中國(guó)藥典》（2010年版一部）制定并收錄了人參和人參葉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但人參果未被收錄。
　　本文建立了人參果的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分別采用高效液相色譜法（HP

2、LC）和紅外光譜法（IR）建立了人參果的指紋圖譜，并應(yīng)用表達(dá)序列標(biāo)簽簡(jiǎn)單重復(fù)序列技術(shù)（EST-SSR）對(duì)樣品進(jìn)行了標(biāo)記，具體研究方法和結(jié)果如下：
　　特性研究：主要通過文獻(xiàn)檢索及人參主產(chǎn)地的現(xiàn)場(chǎng)考察對(duì)人參果原植物的生長(zhǎng)環(huán)境、人參果的采集加工和藥材物理性狀等進(jìn)行了研究和規(guī)范。
　　質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的檢查項(xiàng)目研究：建立人參果藥材中水分、總灰分、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法。規(guī)定人參果藥材中水分不得過9％；總灰分不得過7

3、%；鉛不得過百萬分之二；鎘不得過千萬分之二；砷不得過百萬分之二；汞不得過千萬分之二；銅不得過百萬分之二十；人參果藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量六六六（總BHC）不得過千萬分之一；滴滴涕（總DDT）不得過百萬分之一；五氯硝基苯（PCNB）不得過千萬分之一。按上述方法對(duì)10批人參果藥材進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果均符合規(guī)定。
　　定性鑒別研究：采用薄層層析鑒別法（TLC）建立了人參果中人參皂苷Re、Rg1和Rb1的鑒別方法，結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色

4、譜相應(yīng)的位置處，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
　　含量測(cè)定研究：采用紫外-可見分光光度法建立人參果中人參總皂苷的含量測(cè)定方法，10批樣品中人參總皂苷的平均含量為14.77%，限定人參果按干燥品計(jì)算，含人參總皂苷以人參皂苷Re計(jì)，不得少于12%。采用高效液相色譜法（HPLC）建立人參果藥材中人參皂苷Re和Rd的含量測(cè)定方法，10批樣品中人參皂苷Re的平均含量為4.5%，人參皂苷Rd的平均含量為2.5%，限定人參果按干燥品計(jì)算，含人參皂苷Re不

5、得少于3.5%，含人參皂苷Rd不得少于1.6%。
　　HPLC指紋圖譜研究：采用Agilent C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）， 流動(dòng)相為乙腈-0.05％磷酸水溶液梯度洗脫，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm，柱溫為35℃。結(jié)果確定了7個(gè)特征峰為共有峰，建立了特征峰的共有模式，并指認(rèn)出全部共有峰成分，分別為人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rc、Rb2和Rd。利用中藥色譜指紋圖譜相似度

6、分析軟件，對(duì)10批樣品進(jìn)行HPLC指紋圖譜分析，計(jì)算相似度，結(jié)果顯示其中8批樣品的相似度在0.97以上。
　　紅外指紋圖譜研究：利用紅外色譜法建立了人參果指紋圖譜，分析發(fā)現(xiàn)10批不同產(chǎn)地的人參果提取物具有相似的化學(xué)成分，其中在2000 cm-1左右處，均有明顯的特征峰，可作為人參果進(jìn)行定性鑒別依據(jù)。
　　DNA指紋圖譜研究：應(yīng)用EST-SSR技術(shù)對(duì)10批人參樣品進(jìn)行標(biāo)記，從26對(duì)EST引物中篩選出18對(duì)具有多態(tài)性的引物，在1

7、0個(gè)人參樣品中在165個(gè)位點(diǎn)上擴(kuò)增出條帶，平均每對(duì)引物有7.94個(gè)擴(kuò)增位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)127個(gè)，多態(tài)率為76.97％。結(jié)果表明不同產(chǎn)地的人參存在遺傳差異，相同產(chǎn)地的樣品親緣關(guān)系較近。
　　綜上，本課題首次對(duì)吉林省典型道地藥材人參果進(jìn)行了系統(tǒng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究以及指紋圖譜的研究，系統(tǒng)地對(duì)人參果特性及質(zhì)量的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)定和規(guī)范，為人參果的質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制提供了全面、科學(xué)、有效的方法和依據(jù)，進(jìn)而為人參果相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)，提高人參藥材附加