炎性因子與帕金森病及阿爾茨海默病的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：帕金森病（Parkinson's disease，PD）和阿爾茨海默?。ˋlzheimerdisease，AD）是常見于中老年人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，其病因和發(fā)病機(jī)制目前尚不十分清楚。PD在臨床癥狀上與AD有很大的重疊性，在PD病人中也可產(chǎn)生某些認(rèn)知功能的損害甚至發(fā)展為癡呆。而AD在疾病的中晚期，甚至早期也常出現(xiàn)帕金森綜合癥的表現(xiàn)，是否兩者在發(fā)病機(jī)制上存在某種聯(lián)系成為近年來研究的熱點(diǎn)。
　　 近年來的研究提示，免疫炎性反

2、應(yīng)與神經(jīng)系統(tǒng)的變性疾病包括PD及AD的發(fā)病機(jī)理有著密切的關(guān)系。無論在各種PD和AD動物模型還是在PD和AD患者的病理尸檢中，都發(fā)現(xiàn)在變性的神經(jīng)元周圍聚集著大量被激活的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞，這些小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放大量的炎性因子、炎性蛋白、神經(jīng)毒素，包括白介素1β（intedeukin-1β，IL-1β）、白介素6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor-α，TNF-

3、α）、α1-抗糜蛋白酶（α1-antichymotrypsin，ACT）等。這些高表達(dá)的炎性因子主要存在于PD患者的黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)和AD患者β淀粉樣蛋白（Amyloidβ-protein，Aβ）斑塊和老年斑（senile plaque，SP）的中心。以上的證據(jù)提示，小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞異常激活后釋放的炎性因子可能參與了PD的多巴胺能神經(jīng)元和AD的神經(jīng)元進(jìn)行性變性過程。本研究利用檢測外周血清炎性因子的水平變化及炎性因子基因多態(tài)性研究，

4、進(jìn)一步研究PD和AD可能的發(fā)病原因和發(fā)病機(jī)理。
　　 在炎性因子參與AD的致病過程中，Aβ起著重要作用。淀粉樣前體蛋白（Amyloid Precursor Protein，APP）經(jīng)過分泌酶的分解產(chǎn)生Aβ。在血小板中包含了外周循環(huán)中95％以上的APP。在AD患者腦中APP經(jīng)β分泌酶參與的淀粉源途徑分解產(chǎn)生沉積在SP中的Aβ，而與在腦組織中的變化相似的是，在AD患者的血小板中，APP代謝的淀粉源途徑被激活，促使Aβ沉積形成AD特異

5、性病理改變中的老年斑。單克隆抗體22C11可以封閉APP的氨基未端，用其做免疫印跡，可以把這些APP分成分子量為120-130kDa和110kDa的兩個片段。近來的研究發(fā)現(xiàn)，AD患者血小板中的APP兩種片段的比例（APP ratio，APPr）與正常對照組相比有明顯下降。
　　 目的：通過脫察PD患者和AD患者外周血清IL-1β、IL-6、TNF-α、ACT的水平及檢測IL-6、ACT和載脂蛋白E（Apolipoprotein

6、E，ApoE）基因多態(tài)性，進(jìn)一步了解PD和AD的病因和發(fā)病機(jī)制，為開發(fā)新的能夠延緩PD和AD進(jìn)程的藥物尋找一些特異的生物學(xué)標(biāo)記，為提供安全有效的治療方法提供理論依據(jù)，同時(shí)我們測定我國AD患者外周血小板源性的APPr的變化，并分析炎性蛋白ACT對APPr的影響，以期發(fā)現(xiàn)我國AD患者APPr的特點(diǎn)，為找到AD診斷的外周生物學(xué)新指標(biāo)提供新思路。
　　 方法：本文采用病例-對照研究，選取PD患者150例，AD患者100例，健康對照100

7、例，于清晨對PD患者、AD患者及健康對照空腹采集靜脈血，提出全血基因組DNA后，采用基因芯片對所有對象進(jìn)行IL-6、ACT和ApoE基因多態(tài)性的檢測，分析各基因多態(tài)性與疾病的關(guān)系。并各選取40例分離血清后，采用央心式酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進(jìn)行IL-1β，IL-6，TNF-α，ACT的測定，分析各炎性因子與PD和AD的關(guān)系。運(yùn)用蛋白免疫的方法（Western Blot），對40例AD患者與30例對照組的血小板APPr進(jìn)行測定，采用S

8、PSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P<0.05或P<0.01為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、病例組和對照組年齡、性別匹配，具有可比性。
　　 2.、AD組、PD組和對照組三組血清中IL-1β水平不同，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=105.959，P=0.000）。PD組血清IL-1β水平高于AD組和對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。AD組血清IL-1β水平也高于對照組，差異具有統(tǒng)

9、計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3、AD組、PD組和對照組三組血清中IL-6水平不同，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.352，P=0.000）。AD組與PD組血清IL-6水平高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 4.、AD組、PD組和對照組三組血清中TNF-α水平不同，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=48.702，P=0.000）。AD組與PD組血清TNF-α水平高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0

10、5）。
　　 5.、AD組、PD組和對照組三組血清中.ACT水平不同，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=20.966，P=0.000）。AD組與PD組血清ACT水平高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 6、對40例AD患者進(jìn)行MMSE評分與血清IL-1β、IL-6、TNF-α、ACT水平的相關(guān)分析顯示：MMSE分值與血清IL-6水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.951，P<0.05），兩者回歸系數(shù)具有顯著意義（P<0.

11、01）。MMSE分值與血清ACT水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.598，P<0.05），兩者回歸系數(shù)具有顯著意義（P<0.01）。
　　 7、對40例PD患者進(jìn)行H-Y評分與血清IL-1β、IL-6、TNF-β、ACT水平的相關(guān)分析顯示：H-Y評分與血清IL-1β水平呈正相關(guān)（r=0.686，P<0.05），兩者回歸系數(shù)具有顯著意義（P<0.01）。H-Y評分與血清ACT水平呈正相關(guān)（r=0.874，P<0.05），兩者回歸系數(shù)具有顯著

12、意義（P<0.01）。
　　 8、AD、PD患者的ApoE基因型分布與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組基因型分布中，ε3/3型都是最多的，AD組攜帶ε4等位基因的基因型（ε2/4、ε3/4、ε4/4）分布頻率高于對照組。三組ApoE等位基因頻率分布差異有顯著性（P<0.05）。AD組中ApoEε2等位基因頻率較對照組低，ApoEε4等位基因頻率高于對照組，帶有ApoEε4等位基因患AD的風(fēng)險(xiǎn)是不帶有ε4等位基因的

13、3.143倍，ε4等位基因與PD患病危險(xiǎn)性無相關(guān)（P>0.05）。
　　 9、AD和PD的IL-6各基因型分布及等位基因分布與對照組相比無明顯差異，且與ApoEε4無相關(guān)性。
　　 10、AD組ACT基因型和等位基因分布與對照組相比無顯著性差異（P>0.05）。PD組ACT A/A基因型頻率明顯高于對照組（P<0.05），且ACT A/A基因型使PD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加2.756倍。與ApoE基因相關(guān)性分析顯示，同時(shí)攜帶ε4與

14、A等位基因的AD患者百分比增高，使AD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加2.984倍。PD組與對照組相比無相關(guān)性。
　　 11、AD組血小板APPr小于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。將40例AD病人以血清ACT水平分成兩組后，AD合并高ACT組（血清ACT>70mg/dl）和AD合并低ACT組（血清ACT<60mg/dl）血小板APPr小于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；AD合并高ACT組與AD合并低ACT組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)

15、意義（P=0.125）。
　　 結(jié)論：
　　 1、AD、PD患者的外周血清中所測的炎性因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、ACT）水平升高可能是AD及PD發(fā)病的危險(xiǎn)因素，其中血清IL-6、ACT水平與AD患者認(rèn)知功能障礙程度相關(guān)，血清IL-1β、ACT水平與PD患者運(yùn)動障礙程度相關(guān)。
　　 2、ApoEε4等位基因攜帶是AD的危險(xiǎn)因素，與PD患病危險(xiǎn)性無關(guān)。ApoEε2等位基因可能是AD的保護(hù)性因子。IL-6