金錢松種子萌發(fā)條件優(yōu)化和快速繁育研究.pdf

1、實驗通過單因素試驗和正交試驗的研究方法，優(yōu)化金錢松種子萌發(fā)條件;建立金錢松快速繁育體系;建立金錢松植物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)和植株快速再生的培養(yǎng)體系;探究利用金錢松種子誘導(dǎo)多倍體的最佳培養(yǎng)條件;從金錢松植株的新鮮枝條中分離出內(nèi)生菌，并進(jìn)行了抗菌試驗研究。具體實驗結(jié)果如下:
　　(1)通過單因素試驗研究了1％多菌靈溶液消毒處理對其種子的萌發(fā)率和染菌率的影響。實驗結(jié)果表明，隨著1％的多菌靈溶液處理金錢松種子時間的增長，其種子的萌發(fā)率和染菌率均

2、表現(xiàn)出逐漸下降的趨勢，最有利于提高金錢松種子的萌發(fā)率和降低其種子的染菌率的處理方式為1％多菌靈溶液處理金錢松種子3h，種子的萌發(fā)率為(82±0.32)％，而污染率僅為(3±0.49)％。另外，實驗還研究了不同赤霉素濃度、不同溫度和浸泡不同時間對金錢松種子萌發(fā)的影響，研究結(jié)果表明，金錢松種子在60℃下，用6‰赤霉素浸泡2h后，再放在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)30d，種子萌發(fā)率最高，為97.33％。
　　(2)以金錢松胚軸為外植體誘導(dǎo)愈傷組織的最佳

3、培養(yǎng)基為MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.1mg/L;影響胚軸外植體快速產(chǎn)生愈傷組織除了激素配比外，還與外植體的接種方式、切割方式有關(guān);研究培養(yǎng)過程中形成的六種愈傷組織，得出顏色呈綠色、淺綠色的愈傷組織細(xì)胞活力是最高的。
　　(3)金錢松細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基MS+6-BA1.0mg/L+2，4-D0.3mg/L+蔗糖40g/L+接種量1.2g/40ml+pH6.0;在細(xì)胞的生長過程中，具體表現(xiàn)為，

4、延遲期為0～3d，指數(shù)期為3～7d，衰落期為7～20d;另外，在實驗中觀察還發(fā)現(xiàn)，翠綠的愈傷組織生長速度快，黃綠色和黃色的愈傷組織生長速度慢、且褐變速率快。
　　(4)在金錢松植株快速再生研究中，選取金錢松葉片作為外植體誘導(dǎo)愈傷組織，其愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為GD+NAA1.0mg/L+GA31.0mg/L，在培養(yǎng)30d后統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)率為65.4％，誘導(dǎo)不定芽最佳培養(yǎng)基為MS+TDZ0.2mg/L+Ad20mg/L，培養(yǎng)35

5、d誘導(dǎo)率為23.1％;誘導(dǎo)不定根的最佳培養(yǎng)基為1/3MS+IAA1.0mg/L+活性炭30mg/L，培養(yǎng)35d誘導(dǎo)率為54.0％。無菌苗在室內(nèi)環(huán)境下開蓋培養(yǎng)三天以后栽種在大棚中，成活率為93％。
　　(5)在開展金錢松植株的多倍體誘導(dǎo)過程中，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)條件為，在30℃下，0.2％的秋水仙素浸泡36h，誘導(dǎo)率為78.63％;而誘導(dǎo)率最低的條件為，在20℃下，0.1％的秋水仙素中浸泡12h，誘導(dǎo)率為49.94％;當(dāng)秋水仙素濃度0.2

6、％，秋水仙素作用時間從12h升高到36h時，金錢松多倍體誘導(dǎo)率逐漸上升，當(dāng)作用時間從36h升高為48h時，誘導(dǎo)率有下降趨勢。
　　(6)本研究從金錢松新鮮枝條中分離出了JJ18、JJ243、JJ314、JJ318、JJ416、JJ27和JJ46共七內(nèi)生菌;用金黃色葡萄球菌為指示菌，篩選出具有抗菌作用的內(nèi)生菌;提取內(nèi)生菌JJ18代謝物，作用于白色念珠菌、紅色毛癬菌、釀酒酵母菌和黑曲霉，測定了各種菌的MIC（最小抑菌濃度）和MBC（最