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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制PDE5A3基因在人增生前列腺平滑肌細(xì)胞中的表達(dá),為臨床應(yīng)用RNA干擾技術(shù)治療BPH/LUTs提供重要的理論依據(jù)。
方法:
制備4個(gè)靶向人PDE5A3基因的小發(fā)夾RNA(shRNA)表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染人增生前列腺平滑肌細(xì)胞48h后,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-pCR)及Western blot檢測(cè)PDE5A3基因和cGMP的表達(dá)抑制效果。
結(jié)果:
將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
2、人增生前列腺平滑肌細(xì)胞后,各組轉(zhuǎn)染效率均超過90%,并成功誘導(dǎo)了RNA干擾。與空白對(duì)照和陰性對(duì)照組相比,4組shRNA均可在mRNA和蛋白水平降低PDE5A3的表達(dá)(P<0.05),其中siPDE5A3-2抑制效果最為明顯:PDE5A3基因在空白對(duì)照、陰性對(duì)照和siPDE5A3-2組mRNA水平表達(dá)分別為1.05±0.06、0.98±0.06和0.41±0.02;在蛋白水平表達(dá)分別為0.49±0.04、0.46±0.04和0.18±0.
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