新基因CARP信號通路研究.pdf

1、CARP是我們克隆的一個新的腫瘤抑制基因,位于染色體10p13,編碼一個含有445個氨基酸的蛋白,分子量為49.7kDa位于染色體的10p13,有15個外顯子.我們以前的實驗結果提示,CARP可以明顯抑制多種腫瘤細胞系的增殖,比如A549,PG,WM451,PC-3,PC-3M,H7402,BIU87等<'(1)>.為了進一步闡明CARP的功能,我們用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選人心臟cDNA文庫,尋找與之相互作用的蛋白,從而來推測CARP的信號

2、通路及其功能.酵母雙雜交結果顯示CARP與很多蛋白存在著相互作用,其中包括JAB1(Jun-activation domain-binding protein 1).我們從人的心臟cDNA文庫中調取了全長JAB1,通過免疫共沉淀的方法驗證了CARP與JAB1的相互作用.我們又進一步用AP-1熒光報告系統(tǒng)檢驗了CARP可以通過JAB1來抑制AP-1的活性.進一步,我們用western blot方法檢測到CARP可以明顯的調節(jié)c-Jun,p

3、27,p53,p21,Fas等蛋白的表達和活性,為我們下一步實驗提供了很好的提示.同時我們也通過酵母雙雜交方法從人心臟cDNA文庫中調出了一條新基因,我們把它命名為HTRM(Human tRNA(1-methyladenosine)methyltransferase),但是用免疫共沉淀沒有發(fā)現(xiàn)HTRM與CARP存在相互作用.HTRM編碼一個477個氨基酸的蛋白,分子量約為53kDa,定位于染色體的2p23.3,有7個外顯子.亞細胞定位顯