竹子種質(zhì)分子鑒別的聯(lián)合分析.pdf

1、竹子是禾本科(Poaceae/Gramineae)竹亞科(Bambusoideae)一類(lèi)植物，是森林生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，其產(chǎn)業(yè)、生態(tài)和文化價(jià)值高。本實(shí)驗(yàn)以毛竹(Phyllostachys edulis)為例，選擇10份各異種質(zhì)(花毛竹、龜甲竹、厚壁毛竹、圣音竹、綠皮花毛竹、黃槽毛竹、油毛竹、曲稈毛竹、毛竹-M、毛竹-Q)，1份假毛竹和1份桂竹為研究對(duì)象，在分別采用AFLP、ISSR、SRAP，ITS、trnL-F進(jìn)行分子遺傳鑒別基礎(chǔ)

2、上，研究探討使用兩種或三種聯(lián)合的方法，即AFLP+SRAP、ISSR+SRAP、AFLP+ISSR、AFLP+ISSR+SRAP、ITS+trnL-F，進(jìn)行遺傳相似性聚類(lèi)和遺傳距離主坐標(biāo)分析，以匯集更多遺傳信息，提高分子鑒別的支持率和分辨率，主要結(jié)論如下：
　　(1)實(shí)驗(yàn)采用的AFLP、SRAP、ISSR法，擴(kuò)增種質(zhì)位點(diǎn)數(shù)量分別為440、214、77個(gè)，表明其提供的遺傳標(biāo)記信息數(shù)量穩(wěn)定可靠，是供試種質(zhì)進(jìn)行分子鑒別適合的遺傳標(biāo)記方法

3、。ITS序列分析有26個(gè)變異位點(diǎn)，20個(gè)信息位點(diǎn)，變異率為0.0～1.34％；trnL-F序列分析有40個(gè)變異位點(diǎn)，19個(gè)信息位點(diǎn)，變異率為0.32%～2.06%，適合作為供試種質(zhì)進(jìn)行分子鑒別。研究中根據(jù)采用引物的擴(kuò)增位點(diǎn)、特異位點(diǎn)數(shù)量，種質(zhì)鑒別效果分別為：SRAP>AFLP>ISSR，trnL-F>ITS。
　　(2)綜合比較支持率和分辨率，認(rèn)為分子聯(lián)合分析的鑒別效果均優(yōu)于單種鑒別，供試種質(zhì)聯(lián)合鑒別效果為：AFLP+ISSR+S

4、RAP>AFLP+SRAP>ISSR+SRAP>AFLP+ISSR；序列鑒別ITS、trnL-F聯(lián)合分析的結(jié)果也優(yōu)于單序列鑒別。
　　(3)研究揭示出這些種質(zhì)的部分分子遺傳背景。10份供試毛竹種質(zhì)的遺傳相似系數(shù)范圍為0.5997～0.8693，遺傳距離為0.2038～0.6764，序列同源性范圍97.40%～99.9%，變異率范圍為0.0～2.06%。研究中發(fā)現(xiàn)：厚壁毛竹ITS序列在位點(diǎn)7有一C堿基插入，與毛竹-M有15個(gè)位點(diǎn)差異

5、；厚壁毛竹trnL-F序列在位點(diǎn)869有一A堿基缺失，表現(xiàn)出厚壁毛竹作為毛竹的一份特異種質(zhì)的部分遺傳差異。圣音竹trnL-F序列與毛竹-M有14個(gè)位點(diǎn)差異。油毛竹、毛竹-Q有其特殊的遺傳基礎(chǔ)，分子證據(jù)支持江其作為毛竹種下變異類(lèi)型?；窈途G皮花毛竹未表現(xiàn)特殊遺傳關(guān)系。
　　(4)研究中，還首次建立了適宜竹子的SRAP-PCR反應(yīng)體系：20ng模板DNA，2.0mmo1/L Mg2+，175μmol/L dNTPs，0.2μmol/