自交不親和基因在蘿卜種質(zhì)資源中的分布及其分子鑒別.pdf

1、本試驗(yàn)從三個(gè)方面就蘿卜自交不親和性的鑒定方法開展了研究，結(jié)果如下： 1.采用親和指數(shù)法鑒定蘿卜自交系的自交不親和性。本試驗(yàn)所選用的試驗(yàn)材料是經(jīng)過多代自交選育，園藝性狀、自交不親性或親和性等性狀基本穩(wěn)定的蘿卜自交系，共計(jì)282份。首先通過田間花期自交授粉，利用親和指數(shù)法初步鑒定材料的親和性。親和指數(shù)=結(jié)籽數(shù)/授粉花朵數(shù)。嚴(yán)格起見，按下列親和指數(shù)標(biāo)準(zhǔn)，將所有蘿卜試驗(yàn)材料分為四個(gè)等級(jí)，Ⅰ不親和：0≤親和指數(shù)＜0.5、Ⅱ弱親和：0.5≤

2、親和指數(shù)＜1、Ⅲ中親和：1≤親和指數(shù)＜2和Ⅳ親和：親和指數(shù)≥2。結(jié)果顯示：Ⅰ級(jí)材料182份，占所有材料的64.5％；Ⅱ級(jí)材料40份，占所有材料的14.2％；Ⅲ級(jí)材料31份，占所有材料的11.0％；Ⅳ材料29份，占所有材料的10.3％。為進(jìn)一步鑒定自交不親和基因類型以及自交不親和系的選育奠定了基礎(chǔ)。 2.利用特異引物PCR法鑒定不同蘿卜自交系的自交不親和性及其不親和基因的分布。利用已發(fā)表的控制蘿卜自交不親和的15個(gè)基因的全序列，分

3、別設(shè)計(jì)合成了15對(duì)特異引物，通過特異引物PCR技術(shù)，檢測(cè)各自交不親和基因在試驗(yàn)材料中的分布情況。結(jié)果表明：多數(shù)自交不親和基因在Ⅰ級(jí)材料中普遍分布，在Ⅱ級(jí)材料中少量分布，而在Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)材料中基本沒有分布；自交不親和基因的分布與試驗(yàn)材料自交不親和性的表現(xiàn)呈現(xiàn)密切的關(guān)系。本試驗(yàn)初步建立的特異引物PCR法能針對(duì)大多數(shù)自交不親和基因簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地鑒定材料的自交不親和性，測(cè)定周期大為縮短。但是根據(jù)自交不親和基因SLG、SLG6設(shè)計(jì)出的特異引物7

4、s、7a和引物9s、9a擴(kuò)增出來的特異條帶在Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)材料中也有一定分布，似乎與蘿卜不親和性的表現(xiàn)不相關(guān)，需要進(jìn)一步鑒定。 3.蘿卜自交不親和性鑒定的CAPS標(biāo)記的發(fā)展。為了進(jìn)一步分析自交不親和基因SLG、SLG6的存在是否與蘿卜自交不親和性的表現(xiàn)有關(guān)，發(fā)展并利用CAPS標(biāo)記進(jìn)行了分析。用Primer5軟件尋找出合適的限制性內(nèi)切酶TaqⅠ，并尋找到酶切位點(diǎn)。用限制性內(nèi)切酶TaqⅠ酶切特異引物對(duì)7s、7a和9s、9a擴(kuò)增出的特異片

5、段，得出Ⅰ級(jí)材料中擴(kuò)增出的特異片段被TaqⅠ酶切得出的片段和所預(yù)期結(jié)果一致，而Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)材料擴(kuò)增出的特異片段被TaqⅠ酶切得出的片段成多態(tài)性。結(jié)果表明：利用該CAPS標(biāo)記可以快速、準(zhǔn)確鑒別自交不親和系和自交親和系。 本研究根據(jù)Genebank中已發(fā)表的的自交不親和基因序列設(shè)計(jì)特異引物，建立了蘿卜自交不親和鑒定的特異引物PCR技術(shù)和CAPS標(biāo)記技術(shù)，該技術(shù)可以快速、準(zhǔn)確地鑒別出自交不親和系和自交親和系，確定材料的各種S單元型，為自