槲皮素對(duì)高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞舒縮功能損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一種常見(jiàn)多發(fā)的代謝性內(nèi)分泌疾病，DM的各種急、慢性并發(fā)癥嚴(yán)重威脅著人類的健康。其中，大血管病變是DM最主要的并發(fā)癥，是DM其他慢性并發(fā)癥的發(fā)病基礎(chǔ)。其發(fā)病機(jī)理與血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血小板激活、凝血及纖溶異常有關(guān)。其主要的病理改變?yōu)閯?dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)，內(nèi)皮細(xì)胞損傷是DM大血管病變的最早期的重要表現(xiàn)，也是AS發(fā)展的始動(dòng)因子。血管內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)合成和釋放多

2、種生物活性物質(zhì)而發(fā)揮調(diào)節(jié)血管張力、維持血液流動(dòng)、防止血栓形成等重要功能，其中一氧化氮(NitricOxide，NO)和內(nèi)皮素(Endothelin-1，ET-1)分別為重要的血管舒張因子及收縮因子，在維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定方面起著重要作用。NO具有松弛血管平滑肌、抗血小板聚集的作用，可減輕氧自由基造成的血管內(nèi)皮功能障礙。ET-1水平升高可引起血管痙攣，血管平滑肌細(xì)胞增殖，血小板黏附、聚集、促進(jìn)血栓形成，誘發(fā)AS。生理情況下，NO與ET-1處于

3、一種平衡狀態(tài)，使得血管維持一定的張力。在高糖環(huán)境下，血管內(nèi)皮屏障功能被破壞，從抗血栓為主的生理狀態(tài)進(jìn)入促血栓形成為主的病理狀態(tài)。因此，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受損傷，增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)有害因子的抵抗力和耐受力，對(duì)預(yù)防糖尿病大血管病變有重要意義。目前研發(fā)中藥治療糖尿病的并發(fā)癥引起了越來(lái)越多學(xué)者的關(guān)注。據(jù)研究顯示，黃酮類化合物具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、降糖、降壓、抗氧化應(yīng)激、抑制醛糖還原酶、抑制非酶糖基化等藥理作用。槲皮素(Quercetin，Qu)屬

4、于黃酮類中抗氧化還原反應(yīng)最強(qiáng)的物質(zhì)之一。有資料顯示，Qu可以有效地發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，但機(jī)理尚未十分明確。本實(shí)驗(yàn)以不同濃度的Qu作用于體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs)，觀察HUVECs的形態(tài)、活力、NO及ET-1的分泌，以及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric OxideSynthase，eNOS)及ET-1的蛋白表達(dá)的變化，

5、研究Qu對(duì)高糖誘導(dǎo)HUVECs舒縮功能損傷的保護(hù)作用，進(jìn)一步探究該藥治療糖尿病大血管病變的可能作用機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng)HUVECs細(xì)胞，選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)期細(xì)胞入組。實(shí)驗(yàn)分6組:①正常對(duì)照組（葡萄糖濃度為5.5 mmol/L）;②高糖損傷組(葡萄糖濃度為30mmol/L);③高滲對(duì)照組（5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇）;④低劑量Qu組（25μmol/LQu+30mmol/L葡萄糖）;⑤中劑量Qu組（

6、50μmol/LQu+30mmol/L葡萄糖）;⑥高劑量Qu組(100μmol/LQu+30mmol/L葡萄糖);各藥物組均在高糖處理前2小時(shí)分別加入藥物，加入藥物后分別培養(yǎng)12，24，48小時(shí)后，觀察HUVECs的形態(tài)，MTT法檢測(cè)細(xì)胞生存活力，以硝酸還原酶法檢測(cè)培養(yǎng)HUVECs細(xì)胞上清中NO的含量，采用放射免疫分析法檢測(cè)HUVECs培養(yǎng)上清液中ET-1含量;Western blot法檢測(cè)HUVECs培養(yǎng)細(xì)胞中ET-1蛋白表達(dá)和eNO

7、S蛋白表達(dá)以及磷酸化程度的變化。
　　結(jié)果:
　　1同一時(shí)間段，高糖組細(xì)胞活性明顯低于正常對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。甘露醇組細(xì)胞活性與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯變化。高糖組細(xì)胞活性在48小時(shí)內(nèi)隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸下降（P＜0.05）。各濃度的Qu干預(yù)組細(xì)胞活性均較高糖組升高，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且成時(shí)間及劑量依賴性。
　　2與正常對(duì)照組相比，高糖組HUVECs培養(yǎng)上清NO分泌量及細(xì)胞中p-eNOS蛋

8、白表達(dá)明顯下降，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，但總eNOS蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化(P＞0.05)，而ET-1的分泌量及蛋白表達(dá)顯著升高，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);與高糖對(duì)照組相比，經(jīng)Qu干預(yù)后，HUVECs培養(yǎng)上清NO分泌量及細(xì)胞中p-eNOS蛋白表達(dá)明顯回升，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，ET-1的分泌量及蛋白表達(dá)顯著下降，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），且呈劑量依賴性。
　　結(jié)論:
　　1高糖可誘導(dǎo)HUVECs