實時熒光定量檢測端粒酶活性及相應標志物免疫組化分析在肺癌診斷中的綜合應用.pdf

1、肺癌的預后取決于早期篩查、早期診斷以及早期、有效的治療,細胞病理學檢測是肺癌早期診斷、疾病分期和療效監(jiān)測的重要手段。但由于靈敏性尚難以達到人們對肺癌早期診斷的要求,一直困撓著臨床。挖掘更靈敏的標志物和更簡便快捷的檢測方法,成為研究熱點之一。研究表時幾乎所有人肺癌細胞株及大多數肺癌組織均有端粒酶的表達,并隨腫瘤發(fā)展階段呈進行性升高趨勢,提示端粒酶活性在肺癌的發(fā)生及腫瘤的發(fā)展中有著重要的作用。本研究利用熒光標記的置換探針(displacin

2、g probe)建立一種實時熒光-端粒酶重復擴增(TRAP)法,并應用于肺癌細胞系、肺癌冰凍組織和臨床體液樣本。結果顯示,實時熒光TRAP法具有簡便、快速、靈敏、精確的優(yōu)勢,其靈敏性可達到0.5％。對83例肺癌組織和20例肺良性病變樣本的檢測結果表明,端粒酶活性是鑒別肺良、惡性病變的可靠指標。端粒酶活性在不同肺癌組織學類型之間具有顯著差異,復合型小細胞癌活性較高,鱗癌和腺鱗癌次之,腺癌的端粒酶活性較低。此外端粒酶活性與肺癌組織學類型及腫

3、瘤分化程度呈相關性。復合型小細胞癌活性較高,鱗癌和腺鱗癌次之,腺癌的端粒酶活性較低。腫瘤分化程度越低,端粒酶活性越高?？梢娛褂渺`敏的實時熒光PCR定量檢測端粒酶活性可作為肺癌診斷重要輔助手段,特別是對于可疑的病例,端粒酶檢測是鑒別診斷和監(jiān)測療效的有效方法。
　　 人端粒酶活性是由其逆轉錄酶(human telomerase reverse transcnptase,hTERT)催化亞基在轉錄水平進行調控,迄今為止在其逆轉錄酶基序

4、(motif)已發(fā)現3個主要的缺失剪接位點。這些缺失體的表達水平及其對端粒酶活性的影響尚未完全闡明。本研究利用特異的置換探針,對肺癌細胞系和冰凍肺癌組織的hTERT'及其缺失體的表達進行實時定量檢測。4種肺癌細胞系均具有不同水平的端粒酶活性和hTERT轉錄體的表達。83例肺癌組織樣本檢測出不同表達水平的hTERT總轉錄體,相對表達量在0.35-647之間(中位值=9.30),但與端粒酶活性TPG值之間未見統(tǒng)計學相關性。此外,我們還對46

5、例胸腔積液和23例支氣管肺泡灌洗液樣本進行端粒酶活性檢測,并與常規(guī)涂片法的細胞學診斷做對比,同時利用剩余沉淀細胞進行瓊脂-石蠟雙包埋和免疫組織化學染色以進一步校正診斷。在48例細胞學診斷明確的樣本中,有43例(89.58％)樣本的端粒酶活性檢測結果與細胞學診斷相一致。在利用免疫組化標記和綜合臨床病理資料的基礎上,對細胞學診斷(特別是可疑病例)進行校正后,端粒酶活性檢測的敏感性為82.14％,特異性為95.24％,若將細胞學診斷與端粒酶活