大腸癌組織端粒酶活性檢測(cè).pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文大腸癌組織端粒酶活性檢測(cè)姓名：田德清申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：于躍明李春仲2002.3.1中文摘要探討其在大腸癌預(yù)防、早期診斷、治療、判斷愈后、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)方面的臨床價(jià)值及重要作用。／方法：本實(shí)驗(yàn)為了防止RNase污染，實(shí)驗(yàn)過(guò)程所用物品均經(jīng)高壓消毒和焦碳酸二乙酯水處理。本實(shí)驗(yàn)采集40例大腸癌組織標(biāo)本及10例正常大腸粘膜組織標(biāo)本。標(biāo)本均取自河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外二科2000年11月～2001年3月

2、手術(shù)切除標(biāo)本。標(biāo)本均于離體后半小時(shí)內(nèi)采集，液氮速凍，后轉(zhuǎn)至80。C冰箱貯存待檢。所有病例均經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院病理證實(shí)。標(biāo)本采集齊全后，采用端粒重復(fù)擴(kuò)增法(telomericrepeatamplificationprotocolassay，TRAP)分五組進(jìn)行端粒酶活性檢測(cè)，每組皆做陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照及空白對(duì)照。步驟為(1)端粒酶提取。(2)用RTPCR技術(shù)進(jìn)行端粒重復(fù)序列擴(kuò)增。(3)用微孔板反向雜交法進(jìn)行產(chǎn)物雜交。(4)端粒酶活性判

3、定：用U2000型分光光度計(jì)測(cè)雜交產(chǎn)物在波長(zhǎng)450rim時(shí)的光密度(OD值)，以空白對(duì)照雜交產(chǎn)物校零。陰性對(duì)照雜交產(chǎn)物OD值低于005時(shí)按005計(jì)算，高于005時(shí)按實(shí)際OD值計(jì)算。樣本雜交產(chǎn)物OD值大于或等于陰性對(duì)照雜交產(chǎn)物OD值的21倍時(shí)，判為端粒酶活性陽(yáng)性。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用X2檢驗(yàn)。結(jié)果：(1)40例大腸癌組織中，34例端粒酶活性陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為85O％，10例正常大腸粘膜組織中端粒酶活性表達(dá)均為陰性。兩組陽(yáng)性率比較差異有顯著性(