滋養(yǎng)細胞疾病的遺傳學研究.pdf

1、第一部分葡萄胎的臨床病理特征及分子遺傳學研究背景及目的:葡萄胎是滋養(yǎng)細胞疾病中最常見的類型，以往根據臨床病理特征分析把葡萄胎分為部分性葡萄胎(PHM)和完全性葡萄胎(CHM)兩類。近年來的研究發(fā)現了第三種類型的葡萄胎——雙親來源完全性葡萄胎(BiCHM)，并且常與罕見的家族性復發(fā)性葡萄胎(FRHM)相關，對幾個FRHM家系的研究認為該病可能是常染色體隱性遺傳病，并將該病的致病基因定位于染色體19q13.4區(qū)域，對更多FRHM家系的研究

2、將有助于縮小該致病基因的范圍，并最終找到特異性的致病基因。 本部分研究擬對葡萄胎及其雙親進行微衛(wèi)星多態(tài)性分析，以確定其遺傳學起源；并通過檢測BiCHM中母源印記基因CDNK1C的表達情況，探討其可能的發(fā)病機制；最后，通過對FRHM家族成員染色體19q13.4區(qū)域的基因型研究，對該病的致病基因進行定位分析。 材料、方法及結果: 一、葡萄胎的遺傳學起源分析采集兩個FRHM家系的臨床資料，收集其中各1例葡萄胎和6例散發(fā)

3、性葡萄胎及其雙親的外周靜脈血。首先，經病理學檢查確定這8例均為葡萄胎，并根據臨床病理特征區(qū)分為PHM或CHM。然后，提取以上標本的DNA，在提取石蠟包埋葡萄胎組織的DNA時，采用激光捕獲顯微切割技術對石蠟塊中的葡萄胎組織進行純化，以避免母源污染；之后，選用位于不同染色體上的雜合度較高的微衛(wèi)星標記對上述DNA(包括葡萄胎及其雙親)分別進行PCR擴增；最后，將獲得的擴增片段進行聚丙烯酰胺凝膠電泳或用DNA自動測序儀測定目的片段的長度，將葡萄

4、胎的目的片段與其雙親的目的片段進行比較，以確定葡萄胎擴增片段的親源性，并據此對葡萄胎進行分子遺傳學分型。結果發(fā)現，兩個來自FRHM家系中的葡萄胎均為BiCHM；6例散發(fā)性葡萄胎中，1例經病理學診斷為PHM者在微衛(wèi)星多態(tài)性檢測中獲得證實，5例散發(fā)性CHM經微衛(wèi)星多態(tài)性檢測均證實均為AnCHM。 二、BiCHM中p57KIP2蛋白的表達情況對已經確定為BiCHM的2例來自FRHM家系的葡萄胎進行母源轉錄的印記基因CDNK1C表達產物

5、——p57KIP2蛋白免疫組化染色，結果均為陰性，提示該基因在BiCHM中表達缺失。 三、FRHM的染色體19q13.4基因型分析收集2個FRHM家系中家族成員的外周靜脈血標本共計7份，提取DNA。用19q13.4內的25個微衛(wèi)星標記對上述7份DNA進行PCR擴增，所得的擴增片段經DNA自動測序儀分析，并根據每一家系中各個成員的微衛(wèi)星標記擴增片段的大小進行綜合分析和排列組合，確定每個家族成員最可能的單體型。結果發(fā)現，兩個FRHM

6、家系中3名患者在19q13.4內均表現為雜合子。 結論: 一、通過檢測和分析葡萄胎及其雙親DNA的微衛(wèi)星多態(tài)性，證實以遺傳學起源為基礎，可將葡萄胎分為三種類型：1.部分性葡萄胎(PHM)：為雙親來源的三倍體，一組染色體來自母親，另兩組染色體來自父親；2.孤雄來源完全性葡萄胎(AnCHM)：為孤雄二倍體，兩組染色體均來自父親，沒有母親的遺傳物質；3.雙親來源完全性葡萄胎(BiCHM)：為雙親二倍體，一組染色體來自父親，另一

7、組則來自母親。并且BiCHM常與家族性復發(fā)性葡萄胎(FRHM)的遺傳易感性相關。 二、雖然BiCHM的遺傳學起源和正常妊娠相同，但卻具有和AnCHM完全一致的表型，由此推測基因組印記異常可能在BiCHM的發(fā)病機制中起一定作用。母源印記基因CDNK1C的表達產物——p57KIP2蛋白的免疫組化染色呈陰性進一步證實在BiCHM中確實存在印記基因表達缺失。 三、通過對兩個FRHM家系中7名家族成員19q13.4的微衛(wèi)星多態(tài)性檢

8、測，發(fā)現這些患者的致病基因都不在該已知區(qū)域內，提示該病可能存在遺傳異質性，對更多FRHM家系進行連鎖分析或全基因組掃描將有助于確定新的基因座。 第二部分絨毛膜癌的遺傳學起源研究 背景及目的:絨毛膜癌是一種高度惡性的滋養(yǎng)細胞腫瘤，絕大多數繼發(fā)于各種類型妊娠，稱為“妊娠性絨癌”；有少數與妊娠無關，稱為“非妊娠性絨癌”，二者在遺傳學起源、免疫源性、對化療的敏感性及預后上均不相同，因此，識別絨癌的性質是選擇合理治療方案和正確評估

9、預后的關鍵。然而，目前臨床上對于鑒別絨癌為妊娠性或非妊娠性尚無較好方法，只能臨床臆斷。為此，本部分研究擬采用分子遺傳學方法，對絨癌標本進行遺傳學起源分析，判定其為妊娠性或非妊娠性，同時甄別導致妊娠性絨癌的成因性妊娠的性質，從而解決這一臨床難題。 材料、方法及結果:12例化療前接受過手術治療、臨床病理資料完整的絨癌患者納入本部分研究。首先，收集手術后的絨癌組織蠟塊標本，經病理學檢查確定12例均為絨癌，采用顯微切割技術對石蠟塊中的絨

10、癌組織進行純化后提取DNA；并采集患者及其丈夫的外周靜脈血，提取DNA。然后，選用位于不同染色體上的雜合度較高的微衛(wèi)星標記對上述DNA(包括患者及其丈夫、絨癌標本)分別進行PCR擴增，并用DNA自動測序儀測定目的片斷長度。最后，將絨癌的目的片段與患者及其丈夫的目的片段進行比較，以確定絨癌擴增片段的來源，判斷其為妊娠性或非妊娠性以及妊娠性絨癌的成因性妊娠的性質。結果：12例絨癌中4例為非妊娠性絨癌，8例妊娠性絨癌的成因性妊娠分別為AnCH

11、M(6例)和正常妊娠(2例)。 結論: 一、通過微衛(wèi)星多態(tài)性檢測可以確定絨毛膜癌為妊娠性或非妊娠性，并可以明確其成因性妊娠的性質。 二、發(fā)生妊娠性絨癌前的末次妊娠不一定就是其成因性妊娠，對絨癌進行遺傳學起源分析對于確定其成因性妊娠的性質、以選擇合適的治療方案、并判斷患者的預后具有重要意義。 三、應用分子遺傳學方法對滋養(yǎng)細胞疾病進行遺傳學起源分析時，顯微切割技術為結果的可靠性提供保證，是其中不可或缺的技術手