益腎通絡(luò)方對(duì)膜性腎病大鼠腎臟組織乙酰肝素酶和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察益腎通絡(luò)方對(duì)膜性腎病(membranonsnephropathy，MN)大鼠的24h尿蛋白定量、血液生化檢查及腎臟組織中乙酰肝素酶(hpa)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)表達(dá)的影響，并與鹽酸貝那普利組進(jìn)行比較，以期從實(shí)驗(yàn)角度進(jìn)一步證實(shí)該方對(duì)MN的療效及作用機(jī)理，探索和研究新的治療方法和行之有效的藥物，旨在為臨床提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，拓寬MN的治療領(lǐng)域。
　　 方法：將48只8周齡健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組

2、12只，分別為正常組(NG)、模型組(MG)、益腎通絡(luò)方組(ZG)和鹽酸貝那普利組(BG)。按照Border方法，誘導(dǎo)大鼠MN動(dòng)物模型。預(yù)免疫1周后，MG、BG和ZG每周3次尾靜脈注射陽(yáng)離子化牛血清白蛋白(C-BSA)復(fù)制MN大鼠模型，NG注射等劑量生理鹽水，連續(xù)注射4周。造模成功后BG給予鹽酸貝那普利10mgkg/d灌胃，ZG予以益腎通絡(luò)方煎劑3ml/d灌胃，NG及MG灌服等量的生理鹽水，各組大鼠自由進(jìn)食、飲水。分別于造模前、造模后（

3、實(shí)驗(yàn)第5周末）和治療后（實(shí)驗(yàn)第9周末）代謝籠中留取大鼠24h尿液，進(jìn)行24h尿蛋白定量測(cè)定。然后處死各組大鼠，腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)各組大鼠血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)，并留取腎臟組織，分別在光鏡、電鏡、免疫熒光下觀察大鼠腎小球的變化情況，采用免疫組化法檢測(cè)Hpa和TGF-β1在腎臟組織中的表達(dá)情況，并用病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。
　　 結(jié)果：

4、>　　 1.各組大鼠24h尿蛋白定量
　　 尾靜脈注射C-BSA4周后，MG(26.86±3.66)、BG（26.20±1.58）和ZG（25.60±2.52）三組大鼠均出現(xiàn)大量蛋白尿，與NG（6.40±1.21）相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；給藥4周后，ZG（10.18±1.15）及BG(14.71±2.42)24h尿蛋白定量均明顯降低，與MG（25.03±7.28）相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；ZG（10.18±

5、1.15）與BG（14.71±2.42）比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。ZG治療后（10.18±1.15）與治療前（25.60±2.52）比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)；BG治療后（14.71±2.42）與治療前（26.20±1.58）比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 2.血液生化結(jié)果
　　 治療后ZG、BG血清TP、ALB均有不同程度升高，與MG組
　　 (60.67±5.09、29.59±3.01

6、)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，ZG（74.19±3.21、38.28±2.46）與BG（68.16±3.22、32.95±1.45）相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；ZG、BG血清TC、TG均有不同程度降低，與MG組（4.82±0.71、0.67±0.18）相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，ZG（2.76±0.10、0.31±0.03）與BG(3.22±0.39、0.39±0.03)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；各組大鼠血清B

7、UN、Scr與NG比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.光鏡、電鏡和免疫熒光觀察
　　 光鏡下NG腎小球結(jié)構(gòu)無明顯異常。MG腎小球體積增大，球內(nèi)細(xì)胞增多，毛細(xì)血管壁明顯增厚，腎小球周圍大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小球分葉明顯，腎小管近曲小管水腫，Masson染色可見腎小球基底膜彌漫增厚，腎小管上皮細(xì)胞大量空泡變性及顆粒變性，腎間質(zhì)可見少量淋巴和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維化，小動(dòng)脈壁增厚。ZG腎小球結(jié)構(gòu)改變不明顯。BG腎小球體積

8、輕微增大，球內(nèi)細(xì)胞增多，毛細(xì)血管壁增厚不明顯。
　　 電鏡下NG極少量電子致密物沉積，足細(xì)胞足突存在明顯。MG可見腎小球基底膜內(nèi)多數(shù)電子致密物沉積，電子致密物周圍大量基底膜增生，細(xì)膜基質(zhì)增生，足細(xì)胞足突彌漫融合。ZG腎小球基底膜內(nèi)少數(shù)電子致密物沉積，部分足細(xì)胞足突彌漫融合。BG腎小球基底膜內(nèi)電子致密物沉積，電子致密物周圍基底膜增生，細(xì)膜基質(zhì)增生，部分足細(xì)胞足突彌漫融合。
　　 免疫熒光MG可見IgG和C3呈細(xì)顆粒狀沿腎小

9、球毛細(xì)血管壁及部分系膜區(qū)沉積。NG表現(xiàn)不明顯，ZG可見輕度的IgG和C3沉積，BG可見少量的IgG和C3呈細(xì)顆粒狀沿腎小球毛細(xì)血管壁沉積。
　　 4.免疫組化
　　 治療后ZG、BG腎臟組織中Hpa(LOD值)和TGF-β1陽(yáng)性表達(dá)率(％)均有不同程度降低，與MG（85.06±5.99、55.33±6.92）相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，ZG(23.42±3.78、26.97±5.74)與BG（54.53±9.73、

10、35.75±5.63）相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.“健脾益腎、活血通絡(luò)”是導(dǎo)師根據(jù)MN本虛標(biāo)實(shí)的發(fā)病特點(diǎn)提出的治療方法。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)益腎通絡(luò)方是體現(xiàn)該法的有效方劑。
　　 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明益腎通絡(luò)方能降低MN大鼠24h蛋白尿含量、提高TP和ALB、降低TC、TG，對(duì)Hpa和TGF-β1表達(dá)具有調(diào)節(jié)的作用。
　　 3.益腎通絡(luò)方能減少M(fèi)N大鼠免疫復(fù)合物在GBM的沉積，減輕GB