益腎通絡(luò)方對膜性腎病大鼠的腎保護(hù)作用以及對腎組織Nephrin mRNA、Podocin mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本研究通過陽離子化牛血清白蛋白的方法建立膜性腎病大鼠模型，并應(yīng)用益腎通絡(luò)方對模型進(jìn)行干預(yù)性治療，通過觀察大鼠的24小時(shí)尿蛋白定量、血清總蛋白、白蛋白、血脂、血肌酐、尿素氮等生化指標(biāo)以及腎組織Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表達(dá)，探討益腎通絡(luò)方對膜性腎病的治療作用及其可能機(jī)制，從而為臨床上治療膜性腎病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法:選用清潔級健康雄性Wistar大鼠60只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后留

2、取大鼠尿液，測24小時(shí)尿蛋白定量均為正常。采用隨機(jī)法將大鼠分為正常組15只，造模組45只。除正常組外，其余造模組大鼠預(yù)免疫一周后，隔日一次尾靜脈注射C-BSA復(fù)制膜性腎病大鼠模型。連續(xù)注射4周后測24小時(shí)尿蛋白定量。確認(rèn)造模成功后將造模組大鼠隨機(jī)分為三組:模型組、鹽酸貝那普利組及中藥組。鹽酸貝那普利組給予鹽酸貝那普利10mg/kg/d灌胃，中藥組予以益腎通絡(luò)方3ml/d灌胃，正常組及模型組灌服相當(dāng)量的生理鹽水，各組共給藥四周。給藥結(jié)束后

3、，禁食不禁水留取各組大鼠24小時(shí)尿液測定24小時(shí)尿蛋白定量，隨后將大鼠處死，取血檢測實(shí)驗(yàn)?zāi)┭蹇偟鞍?TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)，留取腎組織，免疫熒光、光鏡、電鏡觀察大鼠腎組織病理變化，Real-time PCR法檢測Nephrin mRNA、Podocin mRNA在腎組織中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、實(shí)驗(yàn)大鼠的一般狀況
　　 正常

4、組大鼠飲食及尿量正常，眼睛有神，反應(yīng)敏捷，肌肉豐滿。造模的大鼠尾靜脈注射C-BSA后，均出現(xiàn)明顯的納食少、精神萎靡，毛發(fā)脫落，少動抱團(tuán)，部分大鼠出現(xiàn)腹水及陰囊水腫。實(shí)驗(yàn)最后一周，與正常組相比，造模各組大鼠明顯體型瘦小，毛發(fā)脫落，模型組的癥狀最為顯著。造模期間除正常組外，造模組有三只大鼠死亡，死亡原因估計(jì)為注射C-BSA后的過敏反應(yīng)以及嚴(yán)重感染，最終導(dǎo)致臟器衰竭。
　　 2、24小時(shí)尿蛋白定量的比較
　　 24小時(shí)尿蛋白定

5、量，在連續(xù)尾靜脈注射C-BSA4周后，造模組與正常組比較顯著升高(P＜0.05）;給藥4周后，鹽酸貝那普利組及中藥組與模型組相比明顯降低(P＜0.05），而鹽酸貝那普利組與中藥組比較無明顯差異(P＞0.05）。
　　 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組大鼠血液生化指標(biāo)的檢測
　　 模型組、鹽酸貝那普利組、中藥組與正常組相比血清TP、ALB均明顯降低而TC、TG均明顯升高，有顯著性差異（P＜0.05）;鹽酸貝那普利組、中藥組與模型組相比，

6、血清TP、ALB均明顯升高而TC、TG均明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05）;中藥組與鹽酸貝那普利組相比差異性不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）;各組大鼠血清BUN、Scr比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）;
　　 4、腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察
　　 免疫熒光觀察顯示:正常組大鼠無明顯變化;模型組大鼠可見IgG、C3呈彌漫性的顆粒狀沿腎小球毛細(xì)血管袢沉積;中藥組與鹽酸貝那普利組大鼠腎組織中IgG、C3呈顆粒狀沿腎小球毛細(xì)

7、血管袢呈現(xiàn)少量沉積。
　　 光鏡下觀察顯示:正常組無明顯異常改變，模型組可見腎小球毛細(xì)血管袢基底膜明顯增厚，內(nèi)皮細(xì)胞核顯著增大，“釘突”較大;鹽酸貝那普利組及中藥組毛細(xì)血管袢基底膜增厚較模型組減輕，內(nèi)皮細(xì)胞核輕微增大，可見少量“釘突”形成。
　　 電鏡下觀察顯示:正常組大鼠腎組織足細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚，足突排列整齊;模型組可見腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚明顯，腎小球上皮下有大量類似電子致密物沉積，足突相互融合，可見釘突形成;中藥組與

8、鹽酸貝那普利組大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜輕度增厚，腎小球上皮下有少量的電子致密物沉積，部分足細(xì)胞足突開始出現(xiàn)融合。
　　 5、腎組織中Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表達(dá)情況
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表達(dá)明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)，與模型組相比，中藥組與鹽酸貝那普利組中Nephrin mRNA、Podocin mRNA

9、的表達(dá)有所升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P＜0.05），兩治療組之間比較無明顯差異(P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、益腎通絡(luò)方可以明顯降低膜性腎病大鼠的尿蛋白、提高血清白蛋白、改善血脂代謝。
　　 2、益腎通絡(luò)方能夠抑制膜性腎病大鼠腎小球基底膜免疫復(fù)合物的沉積及基底膜的增厚，減輕腎臟病理損傷，延緩膜性腎病進(jìn)一步發(fā)展。
　　 3、益腎通絡(luò)方能夠上調(diào)膜性腎病大鼠腎組織Nephrin mRNA、Podocin