益腎祛濕通絡(luò)中藥對(duì)膜性腎病大鼠腎保護(hù)作用及腎臟組織中Nephrin、NEPH1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本研究通過(guò)運(yùn)用陽(yáng)離子化牛血清白蛋白（C-BSA）的方法復(fù)制膜性腎病（MN）大鼠模型，并應(yīng)用益腎祛濕通絡(luò)中藥對(duì)模型進(jìn)行干預(yù)性治療，通過(guò)觀察大鼠的24小時(shí)尿蛋白定量（24hUTP）、血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）等生化指標(biāo)以及腎組織 Nephrin、NEPH1的mRNA與蛋白的表達(dá)，探討益腎祛濕通絡(luò)中藥對(duì)膜性腎病的干預(yù)性治療作用及其可能機(jī)制，從而為臨床治療膜

2、性腎病提供新的思路和方法。
　　方法：選用清潔級(jí)健康SD雄性大鼠40只，體重160~180g，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，取各大鼠24小時(shí)尿液，檢測(cè)24hUTP均為陰性。采用隨機(jī)法將大鼠分為正常組（NG）10只、造模組30只。除NG外，造模組大鼠均應(yīng)用自備陽(yáng)離子化牛血清白蛋白預(yù)免疫一周，隨后隔日尾靜脈注射C-BSA復(fù)制MN大鼠模型。NG尾靜脈注射等體積生理鹽水。連續(xù)注射4周后，檢測(cè)大鼠24hUTP確認(rèn)造模成功以后，將造模組隨機(jī)分為中藥

3、組(TCMG)、雷公藤+激素組(T+HG)、模型組(MG)。T+HG及TCMG給予相應(yīng)的藥物灌胃治療，NG及MG給予等量的生理鹽水，各組共給藥4周。給藥結(jié)束后，留取24小時(shí)尿液，檢測(cè)24hUTP，隨后將大鼠處死，取血，留取大鼠腎組織。全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血清TP、ALB、TC、TG、BUN、Scr，并應(yīng)用光鏡、電鏡、免疫熒光觀察大鼠腎小球基底膜及足突的變化情況，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time PCR）、蛋白免疫印跡（We

4、ston-blot）法檢測(cè)Nephrin、NEPH1的mRNA與蛋白在腎組織中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.24hUTP檢測(cè)結(jié)果:與NG相比，其余各組均出現(xiàn)明顯蛋白尿，有顯著性差異；與MG相比，兩治療組24hUTP均明顯降低，有顯著性差異；兩治療組之間相比，無(wú)顯著性差異。
　　2.各組大鼠的生化指標(biāo)比較
　　2.1血清TP、ALB檢測(cè)結(jié)果:與NG相比，其它各組血清TP、ALB均明顯降低，有顯著差異；與MG相比

5、，兩治療組血清TP、ALB均明顯升高，有顯著性差異；兩治療組之間相比，無(wú)顯著性差異。
　　2.2血清TC、TG檢測(cè)結(jié)果:與NG相比，其它各組血清TC、TG均明顯升高，有顯著性差異；與MG相比，兩治療組血清TC、TG均明顯降低，有顯著性差異；兩治療組之間相比，TCMG血清TC、TG明顯低于T+HG，有顯著性差異。
　　2.3血BUN、Scr檢測(cè)結(jié)果:各組大鼠血清BUN、Scr之間無(wú)顯著性差異。
　　3.腎組織病理形態(tài)學(xué)觀

6、察:光鏡下NG腎小球結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯異常，MG大鼠腎小球上皮下嗜復(fù)紅蛋白沉積，基底膜（GBM）彌漫性增厚，足細(xì)胞足突彌漫性融合，兩治療組病理變化較MG減輕。電鏡下NG腎小球結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯異常，MG可見(jiàn)腎小球上皮下大量排列有序的電子致密物沉積，基底膜彌漫性增厚，足細(xì)胞足突彌漫融合，釘突形成，兩治療組病理變化較MG減輕，基底膜輕度增厚，電子致密物沉積較少，足細(xì)胞足突部分融合。免疫熒光顯示：NG未見(jiàn)明顯異常，MG可見(jiàn)IgG沿腎小球毛細(xì)血管壁及部分系

7、膜區(qū)沉積呈細(xì)顆粒狀沉積。與MG相比，兩治療組病理變化較輕，可見(jiàn)少量的IgG沿腎小球毛細(xì)血管壁呈細(xì)顆粒狀沉積。
　　4.腎組織中 Nephrin、NEPH1的表達(dá)情況
　　4.1 Real-time PCR結(jié)果:與NG相比，其它各組Nephrin mRNA、NEPH1 mRNA的表達(dá)明顯降低，有顯著性差異；與MG相比，兩治療組中Nephrin mRNA、NEPH1 mRNA的表達(dá)有所升高，有顯著性差異；兩治療組之間相比，無(wú)顯著

8、性差異。
　　4.2 Western Blot結(jié)果:與NG相比，其它各組Nephrin、NEPH1蛋白的表達(dá)明顯降低，有顯著性差異；與MG相比，兩治療組中 Nephrin、NEPH1蛋白的表達(dá)有所升高，有顯著性差異；兩治療組之間相比，無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1.益腎祛濕通絡(luò)中藥可以改善MN大鼠的尿蛋白，提高血漿蛋白，與雷公藤聯(lián)合激素作用相似。
　　2.益腎祛濕通絡(luò)中藥可改善脂代謝，作用優(yōu)于雷公藤聯(lián)合激素。