T-bet基因轉(zhuǎn)染對支氣管哮喘治療作用的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)針對哮喘患者體內(nèi)T-bet基因表達(dá)低下之現(xiàn)實(shí),擬通過靶向基因轉(zhuǎn)染方式增加氣道T-bet基因表達(dá),探討T-bet基因在哮喘治療中的作用.第一章哮喘患兒轉(zhuǎn)錄因子 T-bet/GATA-3 mRNA表達(dá)及其與Th1/Th2平衡間的關(guān)系以前的研究多以檢測細(xì)胞因子水平來間接代表Th1、Th2細(xì)胞功能狀態(tài),直接從數(shù)量上檢測哮喘患者Th1、Th2細(xì)胞分化狀態(tài)的報(bào)道甚少,對影響哮喘患者Th1、Th2細(xì)胞分化的上游過程,特別是Th2優(yōu)勢分化的"始動(dòng)

2、"機(jī)制更是了解甚少.研究轉(zhuǎn)錄因子T-bet/GATA-3在小兒哮喘發(fā)病以及Th1/Th2失衡中的作用,國內(nèi)外只有極少文獻(xiàn)報(bào)道.本實(shí)驗(yàn)擬通過半定量RT-PCR檢測部分哮喘患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中T-bet、GATA-3mRNA表達(dá)情況,同時(shí)采用三色熒光流式細(xì)胞儀檢測哮喘患兒的Th1、Th2細(xì)胞數(shù)量,了解T-bet/GATA-3對哮喘患兒的Th細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)作用,為進(jìn)一步的T-bet基因治療提供依據(jù) 第二章小鼠T-bet基因表達(dá)載

3、體的構(gòu)建與鑒定T-bet(T-box expressed in T cells)基因是2000年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新基因,其表達(dá)低下與哮喘發(fā)病直接相關(guān),成為哮喘治療的新基因靶點(diǎn).構(gòu)建合適表達(dá)載體是研究T-bet基因在哮喘治療中作用的前提.目前基因治療常用的體內(nèi)表達(dá)載體有真核表達(dá)質(zhì)粒、腺病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒及腺相關(guān)病毒等載體.真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率相對較低,但操作方便簡單,且安全性好,長期使用無明顯副反應(yīng);病毒載體具有轉(zhuǎn)染效率較高的優(yōu)點(diǎn),但長期使用會(huì)產(chǎn)

4、生抗原性等缺點(diǎn).本實(shí)驗(yàn)依次構(gòu)建小鼠T-bet基因真核表達(dá)載體pcDNA3-T-bet、pCI-T-bet-GFP,逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PMSCV-T-bet和腺病毒載體pAdeno-T-bet.第三章脂質(zhì)體介導(dǎo)的T-bet基因氣道轉(zhuǎn)導(dǎo)對哮喘小鼠氣道炎癥及Th1/Th2平衡的影響現(xiàn)在基因治療已擴(kuò)展到凡是在基因水平上進(jìn)行操作而達(dá)到治療疾病的所有療法,目前國外已采用基因療法來治療支氣管哮喘.使用DNA重組技術(shù)設(shè)法修復(fù)或調(diào)節(jié)細(xì)胞中有缺陷基因,使細(xì)胞恢

5、復(fù)正常功能,可以減少支氣管平滑肌痙攣,減少變態(tài)反應(yīng),從而緩解支氣管哮喘.近年來隨著人們對哮喘發(fā)病機(jī)制的深入認(rèn)識(shí)和基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的迅速發(fā)展,國內(nèi)外學(xué)者對哮喘基因治療作了眾多有益的探索,均顯示出對哮喘小鼠氣道炎癥或氣道高反應(yīng)性的一定抑制作用.然而這些方法要么轉(zhuǎn)入單一Th1類細(xì)胞因子基因,要么封閉單一Th2因子基因,療效仍不理想.我們在成功構(gòu)建小鼠T-bet真核表達(dá)質(zhì)粒的基礎(chǔ)上,擬進(jìn)一步研究氣道內(nèi)T-bet質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)能否逆轉(zhuǎn)Th1/Th2失衡以及