Prader-Willi綜合征臨床表型、生長(zhǎng)激素受體基因外顯子3多態(tài)性及早期篩查和干預(yù)的多中心研究.pdf

1、第一部分Prader-Willi綜合征的臨床表型分析及中外比較
　　目的:Prader-Willi綜合征(PWS)的臨床表型復(fù)雜多樣，并隨年齡增長(zhǎng)而變化。1993年由Holm等人提出了PWS的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，并一直沿用至今。PWS的分子遺傳學(xué)診斷方法也日益成熟，尤以甲基化分析方法中的甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MS-PCR)及甲基化特異性多重連接依賴(lài)的探針擴(kuò)增(MS-MLPA)技術(shù)應(yīng)用最為廣泛。國(guó)內(nèi)對(duì)PWS的研究資料較少，對(duì)我國(guó)PWS

2、的發(fā)病情況、分子遺傳機(jī)制、臨床表型特點(diǎn)和分子診斷學(xué)策略知之甚少。本研究旨在分析我國(guó)PWS患兒的臨床表型特征，并與國(guó)內(nèi)外的相關(guān)研究進(jìn)行比較，同時(shí)對(duì)我國(guó)PWS患兒的不同分子遺傳機(jī)制進(jìn)行鑒別，探討基因型與臨床表型間的關(guān)系，為臨床早期篩選及進(jìn)一步行分子遺傳學(xué)診斷提供幫助。
　　方法:以2007年1月至2012年6月間臨床懷疑或診斷為PWS的70例患兒為研究對(duì)象，采用MS-PCR方法進(jìn)行快速的分子篩查和診斷。根據(jù)Holm等提出的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)

3、中的主要、次要標(biāo)準(zhǔn)，總結(jié)PWS確診病例的臨床表型特征并與國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行比較，進(jìn)而歸納出我國(guó)PWS患兒的典型臨床特征。對(duì)經(jīng)MS-PCR分析確診的患者，采用MS-MLPA和短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)技術(shù)進(jìn)行不同分子遺傳機(jī)制的鑒別。
　　結(jié)果:70例臨床疑診患兒中，男性42例，女性28例，年齡分布在1月～14歲。經(jīng)MS-PCR分析，31(44％)名患兒確診為PWS，其中男性18例，女性13例。對(duì)31例患兒進(jìn)一步行MS-MLPA分析，明

4、確26例為父源缺失型(83.9％)，另5例為甲基化異常，后經(jīng)STR遺傳連鎖分析，明確均為母源同源二倍體型(mUPD，16.1％)，父源缺失型所占比例高于歐美高加索人群而與亞洲人群相似。共有25名患兒的臨床診斷評(píng)分滿(mǎn)足PWS的臨床診斷要求，另6名9月齡以下的嬰兒，分值均低于5分。所有患兒均存在母孕期胎動(dòng)減少、新生兒期肌張力低下、喂養(yǎng)困難。過(guò)度攝食、肥胖、性腺發(fā)育不良的發(fā)生占77.42％(24/31)以上，特殊面容的發(fā)生占54.8％(17/

5、31)，35.5％(11/31)的患兒存在皮膚摳/抓后的活動(dòng)性皮損，僅有12.9％(4/31)的患兒診斷為身材矮小。與mUPD型相比，缺失型患兒更易出現(xiàn)肥胖、過(guò)度攝食、構(gòu)音障礙和手/足小。與中外研究相比，中國(guó)PWS患兒發(fā)育遲緩、身材矮小、唾液粘稠和色素減低的發(fā)生率較低，特殊面容、皮損、行為問(wèn)題、睡眠障礙、手足/小及眼睛問(wèn)題所占比例與臺(tái)灣人群的研究結(jié)果無(wú)差異，但顯著低于歐美人群，而母孕期胎動(dòng)減少、嬰兒期喂養(yǎng)困難及性腺發(fā)育不良的發(fā)生率則高于

6、歐美人群。
　　結(jié)論:PWS分子遺傳學(xué)診斷的具體策略，推薦以MS-PCR方法作為快速篩查手段，在此基礎(chǔ)上結(jié)合MS-MLPA和STR遺傳連鎖分析進(jìn)行不同分子遺傳機(jī)制的鑒別。母孕期胎動(dòng)減少、中樞性肌張力低下、喂養(yǎng)困難是中國(guó)PWS患兒臨床診斷的重要指征，性腺發(fā)育不良、過(guò)度攝食和肥胖也是重要的臨床線索，對(duì)于皮膚色素減低同時(shí)伴有肌張力低下及喂養(yǎng)困難者也應(yīng)提高警惕，而身材矮小的發(fā)生并不多見(jiàn)。
　　第二部分Prader-Willi綜合征患

7、兒GHR基因外顯子3的多態(tài)性研究
　　目的:生長(zhǎng)激素受體(GHR)基因外顯子3多態(tài)性，是目前臨床應(yīng)用生長(zhǎng)激素(GH)治療疾病的研究熱點(diǎn)。本研究目的在于了解中國(guó)PWS患兒GHR基因外顯子3多態(tài)性，并與其他人群的多態(tài)性分布進(jìn)行比較，為探討重組人生長(zhǎng)激素(rhGH)在中國(guó)PWS患兒的臨床應(yīng)用前景及療效與遺傳多態(tài)性間的相關(guān)性提供線索。
　　方法:回顧性分析57例經(jīng)分子遺傳學(xué)確診的PWS患兒。采用多重聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的方法對(duì)GH

8、R基因外顯子3進(jìn)行多態(tài)性分析。與中外正常人群、不同病因的矮小人群和肥胖人群進(jìn)行比較，總結(jié)中國(guó)PWS患兒GHR基因外顯子3的多態(tài)性特點(diǎn)。
　　結(jié)果:57例分子遺傳學(xué)確診的PWS患兒中，GHR外顯子3三種基因型fl/fl、fl/d3、d3/d3的分布頻率分別為70％、23％和7％，與中國(guó)不同地區(qū)正常兒童的分布頻率無(wú)差異，但d3/d3和fl/d3基因型的頻率低于正常歐洲兒童。與不同病因身材矮小兒童進(jìn)行比較，本研究PWS患兒GHR外顯子3

9、基因型的分布頻率與特發(fā)性矮小(ISS)及Turner綜合征(TS)患兒的分布無(wú)差別，但不同于生長(zhǎng)激素缺乏癥(GHD)的患兒。與我院以往的肥胖/超重兒童GHR基因外顯子3多態(tài)性的研究相比，中國(guó)PWS患兒GHR外顯子3基因型的分布特點(diǎn)與肥胖/超重兒童并無(wú)明顯差別。將文獻(xiàn)中報(bào)道的PWS患兒GHR外顯子3基因型與本研究中PWS患兒基因型的分布進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)不同人群PWS患兒GHR外顯子3基因型分布存在差異。
　　結(jié)論:中國(guó)PWS患兒GHR