TRB3基因多態(tài)性與代謝綜合征關(guān)系的研究.pdf

1、研究目的： (1)采用PCR直接測序方法尋找中國山東地區(qū)漢族人群TRB3的SNPs位點； (2)研究TRB3基因SNPs在中國山東地區(qū)漢族人群的基因型分布情況，探討TRB3基因多態(tài)性與MS的關(guān)系； (3)探討IRB3基因多態(tài)性與MS各組分的關(guān)系。 研究對象與方法：選擇參與者417例進行病例一對照研究：其中MS組217例(平均年齡52.7±9.0歲，男性99例，女性118例)，正常對照組200例(平均年齡5

2、1.3±9.7歲，男性90例，女性110例)，兩組間性別和年齡均相匹配。同時隨機收集單純肥胖組96例，平均年齡52.4±10.7歲，男性45例，女性51例。對所有參與者進行體格檢查，測量身高、體重、腰圍、臀圍和血壓等，并詢問既往史、用藥史、家族史等。所有參與者均經(jīng)隔夜禁食12～14小時，次日清晨抽取空腹肘靜脈血，測定血糖(FBG)、胰島素、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-

3、c)、尿酸(UA)；采用酚/氯仿法提取全血DNA，-80℃保存?zhèn)溆?。采用PCR直接測序法檢測TRB3基因第二和第三外顯子多態(tài)性位點，采用PCR-RFLP法檢測TRB3基因+251A/G和+333T/C的基因型，分析TRB3基因多態(tài)性與MS及其各組分的相關(guān)性。 結(jié)果： (1)對照組和MS組臨床特征比較：兩組年齡和性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。與對照組相比，MS患者BMI、腰圍、腰臀比、SBP、DBP、TC、TG、L

4、DL-c、血糖、胰島素、胰島素抵抗指數(shù)、UA、吸煙和飲酒比例均明顯增高(P＜0.05～0.001)，HDL-c顯著降低(P＜0.001)。 (2)對照組和單純肥胖組臨床特征比較：為了進一步驗證TRB3基因多態(tài)性與肥胖的關(guān)系，我們從200例正常對照組隨機選取100例，與單純肥胖組進行匹配，兩組年齡和性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。與對照組相比，單純肥胖組BMI、腰圍、腰臀比、TC、TG、LDL-c、血糖、胰島素、胰島素抵抗指

5、數(shù)、SBP、DBP均明顯增高(P＜0.05～0.01)，余指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 (3)PCR測序結(jié)果：從病例、對照組中分別隨機抽取25例標本，共計50例，對第二外顯子和第三外顯子進行直接測序，結(jié)果顯示第二外顯子出現(xiàn)SNP位點+251A/G，為錯義SNP，第三外顯子存在SNP位點+333T/C，為同義SNP。兩個SNPs與來自NCBI基因庫的TRB3基因相應(yīng)位點rs2295490、rs6051637完全一致。

6、 (4)+251 A/G各基因型間臨床指標比較①對照組與MS組不同基因型間臨床指標比較：與AA基因型攜帶者相比，MS組GG基因型攜帶者腰臀比、TC、TG、LDL-c顯著增高(P＜0.05～0.01)，HDL-c顯著降低(P＜0.01)；與AG基因型攜帶者相比，MS組GG基因型攜帶者腰臀比顯著升高(P＜0.05)，HDL-c顯著減低(P＜0.05)；余指標三個基因型間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均＞0.05)。對照組不同基因型間各臨床指標差異

7、無統(tǒng)計學(xué)意義(P均＞0.05)。 ②對照組與單純肥胖組不同基因型間臨床指標比較：與對照組GG基因型攜帶者相比，單純肥胖組GG基因型攜帶者的BMI、腰圍、腰臀比、TG明顯升高(P＜0.05～0.01)，HDL-c明顯減低(P＜0.05)，余指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均＞0.05)。單純肥胖組內(nèi)GG基因型攜帶者的腰臀比、TG水平均明顯高于AA基因型攜帶者(P＜0.05～0.01)，HDL-c水平則顯著降低(P＜0.01)，余指標在不同

8、基因型間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均＞0.05)。 (5)對照組和MS組SNPs基因型和等位基因頻率分布比較+251A/G位點AA、AG、GG三種基因型的頻率分布兩組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(對照組：從為70.5％，AG為24.5％，GG為5.0％：代謝綜合征組：從為57.6％，AG為36.4％，GG為6.0％；X2=7.705，P=0.021))；與對照組比較，MS組A等位基因頻率明顯減低(82.8％vs 75.8％，P＜0.05)

9、，G等位基因頻率明顯升高(17.2％vs 24.2％，P＜0.05)。而+333T/C位點不同基因型和等位基因的頻率分布兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 (6)TRB3基因SNPs單體型分析：應(yīng)用分析軟件SHEsis對TRB3基因的兩個SNP位點進行單體型和連鎖不平衡分析，發(fā)現(xiàn)+251A/G與+333T/C之間存在連鎖不平衡，D’值為0.740，r2為0.032。在本研究人群中，2個SNPs位點共構(gòu)成4種單體型，GT

10、單體型頻率小于3％，所以被排除在外，其余3種單體型分別為AC、AT和GC。與對照組相比，MS組AC單體型頻率明顯減低(67.1％vs 58.2％，P＜0.05)(OR：0.682，95％CI：0.504-0.923)，GC單體型頻率明顯升高(15.8％vs 22.6％，P＜0.05)(OR：1.563，95％CI：1.075-2.272)，提示MS發(fā)病與+251A/G的G等位基因相關(guān)聯(lián)，而與+333T/C的等位基因T、C無關(guān)。

11、(7)按MS各組分分組后+251A/G基因型和等位基因頻率分布比較。 (8)對照組和單純肥胖組+251A/G基因型和等位基因頻率分布比較：+251A/G位點AA、AG、GG三種基因型的頻率分布兩組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(對照組：AA 70.0％，AG 25.0％，GG 5.0％，單純肥胖組：AA 53.1％，AG 40.6％，GG 6.3％；X2=6.058，P=0.048)：與對照組相比，單純肥胖組A等位基因頻率明顯減低(8

12、2.5％vs73.4％，P＜0.05)，G等位基因頻率明顯升高(17.5％vs 26.6％，P＜0.05)。 (9)SNPs與MS的關(guān)系①MS危險因素Logistic回歸模型：以+251A/G等位基因、年齡、性別、吸煙、飲酒等作為自變量，以MS作為因變量，進行多因素逐步Logistic回歸分析，吸煙、G等位基因進入回歸方程，表明+251A/G多態(tài)性為MS發(fā)病的危險因素，G等位基因攜帶者發(fā)生MS的危險升高，是AA基因型個體的2.3

13、5倍(OR值2.349，95％CI：1.156-4.775，P=0.018)。②+251A/G多態(tài)性對MS組分腹型肥胖的影響：以+251A/G等位基因、年齡、性別、吸煙、飲酒、血壓、血脂、血糖及胰島素等作為自變量，以腹型肥胖作為因變量，進行多因素逐步Logistic回歸分析，性別、TG、G等位基因進入回歸方程，表明G等位基因增加了中心性肥胖的風險(OR值2.35l，95％CI：1.210-4.568，P=0.012)。 ③+25

14、1A/G多態(tài)性對MS組分血脂異常的影響：以+251A/G等位基因、年齡、性別、吸煙、飲酒、血壓、BMI、腰圍、腰臀比、血糖、胰島素和胰島素抵抗指數(shù)等作為自變量，以血脂異常作為因變量，進行多因素逐步Logistic回歸分析，G等位基因、腰臀比、收縮壓、血糖、胰島素進入方程，表明G等位基因增加了血脂異常的風險。 ④+251A/G多態(tài)性對MS組分高血壓的影響：以+251A/G等位基因、年齡、性別、吸煙、飲酒、BMI、腰圍、腰臀比、血糖

15、、胰島素和胰島素抵抗指數(shù)等作為自變量，以高血壓作為因變量，進行多因素逐步Logistic回歸分析，+251A/G多態(tài)性未進入回歸方程；單因素Logistic回歸分析，+251A/G多態(tài)性亦未進入回歸方程。 ⑤+251A/G多態(tài)性對MS組分血糖異常的影響：以+251A/G等位基因、年齡、性別、吸煙、飲酒、BMI、腰圍、腰臀比和血壓等作為自變量，以血糖異常作為因變量，進行多因素逐步Logistic回歸分析，+251A/G多態(tài)性未進入

16、回歸方程；單因素Logistic回歸分析，+251A/G多態(tài)性亦未進入回歸方程。 ⑥+251A/G多態(tài)性對胰島素抵抗的的影響：以+251A/G等位基因、年齡、性別、吸煙、飲酒、BMI、腰圍、腰臀比和血壓等作為自變量，以胰島素抵抗作為因變量，進行多因素逐步Logistic回歸分析，性別、腰圍及腰臀比進入方程，而+251A/G多態(tài)性未進入回歸方程；單因素Logistic回歸分析，G等位基因進入回歸方程，提示G等位基因是與胰島素抵抗的

17、危險因素(OR值1.697，95％CI：1.076-2.677，P=0.023)。 結(jié)論： (1)直接測序發(fā)現(xiàn)中國山東地區(qū)漢族人群中存在TRB3基因第二外顯子+251A/G、第三外顯子+333T/C基因多態(tài)性； (2)正常人和MS患者TRB3基因+251A/G多態(tài)性的基因型和等位基因頻率分布存在顯著性差異，+251A/G多態(tài)性與MS發(fā)病相關(guān)，而+333T/C多態(tài)性的基因型和等位基因頻率分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義；