廣西巴馬小型豬生長激素及其受體基因的克隆和豬生長激素內(nèi)含子3缺失多態(tài)性分析.pdf

1、廣西巴馬小型豬是由廣西巴馬香豬多代近交培育而成的實(shí)驗(yàn)用小型豬，其主要特征是體型矮小。關(guān)于體型矮小變異的分子遺傳基礎(chǔ)，多集中在人的Laron型侏儒癥和性連鎖矮小雞的研究，小型豬的分子遺傳背景研究較少。 本研究根據(jù)生長激素和生長激素受體的生物功能、生理效應(yīng)及前人的研究成果，將其初選為影響廣西巴馬小型豬體型矮小的候選基因，擬通過克隆獲得基因核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)信息。根據(jù)GeneBank登錄的pGH基因全序列和pGHR cDNA序列，設(shè)計(jì)特異

2、性引物，分別以基因組DNA和肝臟總RNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板擴(kuò)增GH基因和GHR胞外域、胞內(nèi)域片段，然后連到pMD18-T載體，篩選陽性重組子測序。結(jié)果顯示，廣西巴馬小型豬與五指山豬GH基因全序列相比，同源性高達(dá)99％，不存在缺失：與普通豬相比在內(nèi)含子3有連續(xù)7bp和15bp的缺失：與太湖豬相比，在內(nèi)含子3同樣位置只有連續(xù)15bp缺失。利用DNAStar軟件將GHR的胞外域和胞內(nèi)域序列拼接成完整的GHR cDNA，與普通豬GHR cDNA相

3、比，同源性為99％，有7處發(fā)生堿基突變，其中兩處為同義突變，一處為終止密碼子突變，四處為錯(cuò)義突變。在錯(cuò)義突變中有三處為非保守性取代，取代的氨基酸理化性質(zhì)改變較大。 基于試驗(yàn)一的研究結(jié)果，設(shè)計(jì)另一對(duì)特異引物擴(kuò)增廣西巴馬小型豬、大約克、杜洛克和環(huán)江香豬GH內(nèi)含子3，通過PAGE和銀染判斷在內(nèi)含子3是否存在缺失。結(jié)果顯示，大約克、杜洛克和環(huán)江香豬內(nèi)含子3電泳條帶在一條直線上且與普通豬(Sus Scrofa)GH內(nèi)含子3大小一致，說明