組蛋白去乙?；窼IRT1在不同類型房顫患者中的作用機制研究.pdf

1、第一部分風濕性心臟病合并房顫患者心房組織組蛋白去乙?；窼IRT1表達與心房纖維化的相關(guān)性研究
　　 目的：通過觀察房顫患者心房肌組織SIRT1的表達情況、心房肌纖維化的程度，SIRT1與心房纖維化的相關(guān)關(guān)系，了解房顫患者心房肌組織SIRT1的表達及其與心房纖維化的相關(guān)性，并通過檢測心房肌組織p53蛋白的表達情況，了解房顫患者心房肌組織SIRT1表達參與房顫及心房纖維化的可能機制。
　　 方法：選擇38例行心臟手術(shù)的風濕

2、性心臟病患者，按照是否合并房顫分為兩組：持續(xù)性房顫組25例(AF組)，其中女性14例，男性11例，年齡范圍31～68歲，平均年齡(47.11±8.82)?；颊叩姆款澇掷m(xù)時間為6個月～11年，平均持續(xù)時間(5.26±1.54)年。竇性心律組15例(SR)組，其中女性9例，男性6例，年齡范圍33～57歲，平均年齡48.24±5.23歲。所有患者手術(shù)前均行心臟超聲評價心臟結(jié)構(gòu)情況；所有標本均來源于行心臟手術(shù)患者的右心耳組織。按照Trizol一

3、步法的步驟提取右心耳組織的總RNA，采用實時熒光定量PCR法檢測SIRT1mRNA在心房組織的表達；采用免疫組化法檢測SIRT1蛋白、p53蛋白在心房組織的表達，采用masson染色評價心房纖維化程度。
　　 結(jié)果判定：實時熒光定量PCR法檢測SIRT1mRNA結(jié)果：用比較閾值法測定目的基因的相對表達量。SIRT1、p53免疫組化檢測結(jié)判斷：陽性著色定義為心房肌細胞著色部位在胞核和胞漿，以心房肌細胞核為主；陰性著色定義為心房肌細

4、胞無明顯著色，部分心房肌細胞胞漿可呈現(xiàn)淺棕色；蛋白表達量=胞核陽性的細胞數(shù)/細胞總數(shù)(％)(每個標本均隨機選取5個高倍鏡視野進行測量，取其均值)。Masson染色評價心房組織纖維化程度：采用膠原半定量分析計算膠原容積分數(shù)，該值代表心房纖維化程度。心房組織切片的光鏡拍片顯示正常膠原纖維為藍色，變性膠原纖維為白色，心房肌組織為紅色。應用醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)，計算膠原容積分數(shù)=膠原纖維/視野面積(％)(每個標本均隨機選取5個高倍鏡視野進行測量，取

5、其均值)。
　　 比較兩組患者SIRT1mRNA及蛋白表達情況、p53蛋白表達情況、心房纖維化程度，分析SIRT1表達與心房纖維化的關(guān)系，SIRT1表達與p53蛋白表達的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.兩組患者心房纖維化程度比較可見AF組纖維化程度更明顯，AF組膠原容積分數(shù)明顯高于SR組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　 2.兩組患者心房組織均可見SIRT1mRNA表達，其中AF組患者SIRT1m

6、RNA表達高于SR組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.01)。
　　 3.兩組患者心房組織均可見SIRT1蛋白表達，其中AF組患者SIRT1蛋白表達高于SR組，差異有統(tǒng)計學意義，(p<0.01)。
　　 4.兩組患者心房組織均可見p53蛋白表達，其中AF組患者p53蛋白表達高于SR組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　 5.SIRT1表達量與心房結(jié)構(gòu)的相關(guān)性分析研究：將AF組SIRT1mRNA及蛋白表達量分別與左

7、房、右房內(nèi)徑行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)SIRT1表達與心房內(nèi)徑無明顯相關(guān)性，其相關(guān)系數(shù)分別為：r=0.198，r=0.047(左房)，r=0.027，r=0.096，p均>0.05(右房)。
　　 6.SIRT1表達量與心房纖維化的相關(guān)分析研究：將AF組SIRT1mRNA及蛋白表達量分別與心房纖維化容積分數(shù)行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)SIRT1mRNA及蛋白表達量與心房纖維化容積分數(shù)均呈負相關(guān)，r=-0.643，r=-0.721，p均<0.05。

8、r>　　 7.SIRT1表達量與P53相關(guān)性分析研究：將AF組SIRT1mRNA及蛋白表達量分別與p53進行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)SIRT1mRNA及蛋白表達量與p53無明顯相關(guān)性，r=0.163，r=0.069，p>0.05。
　　 8.SIRT1表達量與房顫持續(xù)時間相關(guān)性分析：將AF組SIRT1mRNA及蛋白表達量分別與房顫持續(xù)時間行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)SIRT1mRNA及蛋白表達量與房顫持續(xù)時間呈負相關(guān)，r=-0.749，r=-0.6

9、01，p均<0.05。
　　 結(jié)論：房顫患者心房組織SIRT1表達有所增加，隨房顫持續(xù)時間的延長，SIRT1表達呈下降趨勢，SIRT1表達與心房纖維化呈負相關(guān)，與p53表達無明顯相關(guān)性，提示SIRT1高表達可通過抑制心房纖維化，抑制房顫的進展，該保護作用隨房顫持續(xù)時間的延長而逐漸減弱。
　　 創(chuàng)新點與局限性：
　　 1.本研究采用在體心房組織檢測SIRT1的mRNA及蛋白表達，試驗對象比較新穎。
　　 2

10、.本研究針對SIRT1與風濕性心臟病合并的房顫的相關(guān)性進行研究，既往未有相關(guān)報道。
　　 3.本研究發(fā)現(xiàn)風濕性心臟病合并房顫患者心房組織SIRT1表達高于竇性心律患者。
　　 4.本研究發(fā)現(xiàn)SIRT1表達與心房纖維化呈負相關(guān)，可抑制心房纖維化程度，并且該抑制作用隨房顫持續(xù)時間的延長而減弱。
　　 5.本研究發(fā)現(xiàn)SIRT1表達與p53無明顯相關(guān)性。
　　 本研究不足之處在于只對風濕性心臟病患者的SIRT1表

11、達進行研究，結(jié)果有局限性。本研究未闡明SIRT1抑制心房纖維化的具體機制，及SIRT1與房顫關(guān)系的具體機制，可在將來的動物試驗中進一步研究。
　　 第二部分高血壓合并房顫患者外周血單個核細胞組蛋白去乙?；窼IRT1表達與氧化應激及炎癥相關(guān)性研究
　　 目的：觀察高血壓合并房顫患者外周血單個核細胞SIRT1的表達情況，以及外周血氧化應激指標、hsCRP水平，了解房顫患者SIRT1表達及其與氧化應激及炎癥因子的關(guān)系。

12、>　　 方法：選擇2011年1月至2011年12月住院的高血壓病合并房顫患者58例作為試驗組。按照房顫的類型分為兩組：持續(xù)性房顫組33例(AF1組)，持續(xù)性房顫指房顫持續(xù)時間超6個月，年齡范圍45～83歲，平均年齡57.38±6.53歲。房顫持續(xù)時間為7個月～13年，平均時間3.58±1.07年。陣發(fā)性房顫組25例(AF2組)，陣發(fā)性房顫指房顫發(fā)作呈陣發(fā)性，每次發(fā)作時間低48小時，年齡范圍37～69歲，平均年齡56.35±5.68歲。

13、對照組：選擇2011年1月至2011年12月住院的高血壓合并竇性心律患者30例，設(shè)為竇性心律組(SR)，年齡范圍35～78歲，平均年齡52.43±9.37歲。記錄研究組所有患者的一般資料，包括年齡、性別、病史等情況。并分組整理。所有患者抽取靜脈血，采用實時熒光定量PCR方法檢測外周血單個核細胞SIRT1mRNA表達情況，用硫代巴比妥酸法測定外周血中丙二醛(MDA)含量，采用免疫比濁法測定高敏C反應蛋白(hsCRP)含量。分析SIRT1在

14、房顫患者外周血的表達情況，及其與氧化應激指標、hsCRP的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1.三組患者單個核細胞均可見SIRT1表達，其中AF2組表達高于其他兩組，差異有統(tǒng)計學意義，p<0.01，AF1組與SR組比較有增高趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義。p>0.05。
　　 2.各組氧化應激指標(MDA)結(jié)果：AF1組MDA含量高于SR組，差異有統(tǒng)計學意義，p<0.01，AF2組MDA含量與SR組比較無明顯差異p>0.0

15、5，組間比較可見AF1組MDA含量高于AF2組，差異有統(tǒng)計學意義，p<0.01。
　　 3.各組hsCRP水平比較：AF1組hsCRP含量高于SR組，差異有統(tǒng)計學意義，p<0.01，AF2組hsCRP含量與SR組比較有增高趨勢，但無統(tǒng)計學意義，p>0.05，組間比較可見AF1組hsCRP含量高于AF2組，差異有統(tǒng)計學意義，p<0.01。
　　 4.各組SIRT1表達與MDA相關(guān)性分析結(jié)果顯示：AF1組SIRT1表達與MD

16、A呈負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為：rs=-0.416，p<0.05。AF2組SIRT1表達與MDA呈負相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為rs=-0.641，p<0.01。SR組SIRT1表達與MDA無相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為r=0.034，p>0.05。
　　 5.各組SIRT1表達與hsCPR相關(guān)性分析結(jié)果顯示：AF1組SIRT1表達與hsCPR無相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為rs=0.027，p>0.05。AF2組SIRT1表達與hsCPR無相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.00

17、4，p>0.05。SR組SIRT1表達與hsCPR無相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為rs=0.007，p>0.05。
　　 6.SIRT1表達與房顫持續(xù)時間相關(guān)性分析：將AF1組SIRT1表達量與房顫持續(xù)時間行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示SIRT1表達量與房顫持續(xù)時間呈負相關(guān)，rs=-0.834，p<0.01。
　　 結(jié)論：高血壓合并房顫患者外周血單個核細胞可見SIRT1表達增加，其中陣發(fā)性房顫患者增加明顯，持續(xù)性房顫患者有增加趨勢，而且

18、隨房顫持續(xù)時間的延長逐漸下降，SIRT1表達與外周血氧化應激水平呈負相關(guān)，與hsCRP無明顯相關(guān)性，提示SIRT1可通過抑制氧化應激抑制房顫的進展，在房顫中起作用。
　　 創(chuàng)新點及局限性：
　　 1.本研究主要檢測高血壓患者外周血單個核細胞中SIRT1的mRNA表達，研究對象有創(chuàng)新性。
　　 2.本研究針對SIRT1與高血壓合并的房顫的相關(guān)性進行研究，既往未有相關(guān)報道。
　　 3.本研究發(fā)現(xiàn)高血壓合并房顫