組蛋白去乙?；窰DAC1在胃癌中的表觀遺傳調控及其作用機制的研究.pdf

1、胃癌（Gastric Cancer，GC）是四大最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類健康。在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中及治療過程中有許多表觀遺傳學改變，可導致細胞生長、增殖、分化、凋亡等信號通路的異常以及影響對腫瘤的進一步治療。組蛋白去乙?；窰DAC1在表觀遺傳調控網(wǎng)絡中有重要作用，并且在多種惡性腫瘤中表達增高，但其在胃癌中怎樣影響細胞凋亡以及細胞對化療藥物的反應仍有待進一步研究。
　　目的:
　　第一部分研究:已有研究表明阿霉素

2、與HDAC抑制劑聯(lián)用具有協(xié)同作用，但其相互作用的分子機制尚未明確。本實驗意在明確胃癌中HDAC1在阿霉素作用下受表觀遺傳網(wǎng)絡調控的分子機制以及HDAC1在阿霉素抗腫瘤過程中發(fā)揮生物學作用的分子機制。第二部分研究:已有研究表明在胃癌中HDAC1表達增高，但HDAC1在胃癌惡化過程中發(fā)揮作用的分子機制尚未明確。本實驗意在探索HDAC1作為表觀遺傳網(wǎng)絡調控分子抑制胃癌細胞凋亡的分子機制以及HDAC抑制劑（HDACi）促進胃癌細胞凋亡的表觀遺傳

3、學機制。兩部分研究試圖分別從HDAC1對化療藥物作用下的胃癌細胞的影響及HDAC1對胃癌細胞自發(fā)凋亡的影響兩個方面綜合闡釋HDAC1促進胃癌的發(fā)生發(fā)展與耐藥的表觀遺傳學分子機制。
　　方法:
　　第一部分研究:首先通過western blot檢測了胃癌細胞在接受阿霉素處理后HDAC1蛋白表達量的變化。進一步通過軟件篩選及RT-qPCR方法找出在阿霉素處理后影響HDAC1表達的microRNA，并從功能與結構兩方面驗證該mic

4、roRNA對HDAC1的調控。MTS細胞存活實驗證實HDAC1對阿霉素敏感性的影響。最后用流式細胞術驗證HDAC1對阿霉素損傷DNA作用的影響。第二部分研究:首先通過western blot及流式細胞術檢測HDAC抑制劑曲古霉素A(TSA)處理后胃癌中caspase2凋亡信號通路的激活。RT-PCR及westem blot檢測TSA處理后CRADD的表達，進一步用流式細胞術驗證CRADD在TSA誘導的胃癌細胞凋亡中的作用。免疫組化染色分

5、析胃癌中CRADD的表達。接下來運用克隆形成實驗等確認CRADD對胃癌的生長抑制作用。最后應用染色質免疫共沉淀ChIP實驗等證明在胃癌中HDAC1可以直接調控CRADD的轉錄。
　　結果:
　　第一部分研究揭示了胃癌中HDAC1在阿霉素作用下的表觀遺傳學調控機制以及其在阿霉素抗腫瘤作用中的影響。我們發(fā)現(xiàn)阿霉素通過增高miR-520h的表達，miR-520h靶向HDAC13'UTR，繼而特異性地下調HDAC1蛋白的表達，進而使

6、得染色質疏松，促進了阿霉素嵌入DNA結構中，加劇了阿霉素誘導的DNA損傷作用，最終進一步殺傷胃癌細胞。第二部分研究闡述了胃癌中HDAC1調控凋亡信號通路的表觀遺傳學機制及功能。我們發(fā)現(xiàn)在胃癌中HDAC1通過促進CRADD的轉錄表達，最終激活Caspase2并促進Caspase2依賴的細胞凋亡。
　　結論:
　　本篇論文從多角度多方向闡釋了組蛋白去乙?；窰DAC1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的表觀遺傳學調控機制與功能，為HDAC抑制劑治