去骨瓣減壓對(duì)大鼠液壓沖擊腦損傷神經(jīng)凋亡及其調(diào)控機(jī)制的影響.pdf

1、目的:觀察去骨瓣減壓術(shù)對(duì)大鼠液壓沖擊腦損傷Nrf2蛋白表達(dá)、神經(jīng)細(xì)胞凋亡及其相關(guān)調(diào)控因子caspase-3和caspase-12表達(dá)的影響，探討去骨瓣減壓術(shù)在液壓沖擊腦損傷中發(fā)揮抗凋亡作用的機(jī)制。
　　方法:成年、雄性SD大鼠24只，體重350g±50g(約9周齡)，隨機(jī)分為3個(gè)組:假手術(shù)組（sham組）、腦損傷復(fù)骨瓣組(DC-組)和腦損傷去骨瓣減壓組（DC+組），每組各8只。sham組常規(guī)麻醉開(kāi)顱，剪開(kāi)硬膜，但不行液壓沖擊;后兩

2、組均常規(guī)麻醉，頭顱開(kāi)骨窗，行液壓沖擊腦損傷，并剪開(kāi)硬膜，其中DC-組開(kāi)骨窗打擊后，放回原骨瓣，并用牙科丙烯酸水泥粘合固定，縫合頭皮切口; DC+組開(kāi)骨窗打擊后20分鐘內(nèi)用骨鉗從冠狀縫向菱形縫方向擴(kuò)展咬開(kāi)5mm，使骨窗的內(nèi)側(cè)和外側(cè)分別是矢狀縫和上顳線，取出的骨瓣不再放回，縫合頭皮切口。
　　所有動(dòng)物術(shù)后24h進(jìn)行神經(jīng)系統(tǒng)功能評(píng)分，并過(guò)度麻醉、斷頭處死，開(kāi)顱取腦，從損傷區(qū)前緣取大約100mg腦組織應(yīng)用干濕重法測(cè)腦組織含水量;經(jīng)損傷區(qū)切

3、成約3-4mm厚冠狀腦組織片，多聚甲醛固定，HE染色行組織學(xué)觀察，免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)Nrf2、caspase-3和caspase-12蛋白表達(dá)變化，原位末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況;將損傷區(qū)域后緣腦組織迅速置于液氮中，用Western Blot方法檢測(cè)Nrf2核蛋白、caspase-3蛋白和caspase-12蛋白含量。
　　結(jié)果:
　　1神經(jīng)系統(tǒng)功能評(píng)分
　　與sham組相比較， DC+組在術(shù)后

4、24h神經(jīng)功能評(píng)分較低(4.13±0.641)，DC-組在術(shù)后24h神經(jīng)功能評(píng)分也較低(2.25±0.707)，但DC+組在傷后24h神經(jīng)功能評(píng)分比DC-組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2組織學(xué)觀察
　　與sham組相比，DC-組和DC+組動(dòng)物挫傷灶周腦組織24h見(jiàn)細(xì)胞水腫明顯，體積明顯增大，細(xì)胞核膨大，胞漿淡染，局部呈現(xiàn)空泡樣變，周圍伴隨膠質(zhì)細(xì)胞增生，但DC-組比DC+組更明顯。而sham組細(xì)胞胞體完整，胞

5、核清晰，胞漿均勻，大小均勻適中。
　　3大鼠腦組織含水量檢測(cè)
　　與sham組對(duì)比，DC+組在傷后24h腦組織含水量明顯升高(80.638±0.602)，DC-組在傷后24h腦組織含水量亦明顯升高(83.203±0.434)，但DC+組明顯低于DC-組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4 Nrf2、Caspase-3和Caspase-12的免疫組織化學(xué)檢測(cè)
　　Nrf2蛋白表達(dá):主要表達(dá)于神經(jīng)元細(xì)胞和神

6、經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核，在正常腦組織中表達(dá)為陰性或弱陽(yáng)性。sham組Nrf2蛋白表達(dá)量很少。與sham組比較，后兩組神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞胞核中Nrf2的表達(dá)明顯增高，但DC+組（42.120±5.333）明顯高于DC-組(28.036±4.662)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　Caspase-3蛋白表達(dá):與sham組比較，后兩組動(dòng)物腦挫傷灶周腦組織中Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及其著色深度明顯增高，且DC+組Caspase-

7、3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（31.082±5.661）明顯低于DC-組（49.927±4.691），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　Caspase-12蛋白表達(dá):與sham組比較，后兩組動(dòng)物腦挫傷灶周腦組織中Caspase-12陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和其著色程度明顯增高，且DC+組Caspase-12陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(29.687±4.728)明顯低于DC-組(48.137±3.523)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5 Western

8、 Blot檢測(cè)細(xì)胞核Nrf2蛋白，caspase-3和caspase-12蛋白
　　與sham組比較，后兩組動(dòng)物腦挫傷灶周腦組織中Nrf2核蛋白表達(dá)明顯增高，DC+組為（0.759±0.024），DC-組為（0.575±0.049），DC+組Nrf2蛋白表達(dá)明顯高于DC-組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　與sham組比較，后兩組大鼠腦挫傷灶周腦組織中caspase-3蛋白表達(dá)明顯增高，DC+組為(0.721±0.0

9、69)，DC-組為(0.933±0.0465)，DC+組caspase-3蛋白表達(dá)明顯低于DC-組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　與sham組比較，后兩組大鼠腦挫傷灶周圍腦組織中caspase-12蛋白表達(dá)明顯增高，DC+組為(0.634±0.055)，DC-組為(0.827±0.027)，DC+組caspase-12蛋白表達(dá)明顯低于DC-組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　6 TUNEL熒光檢測(cè)法檢查凋

10、亡細(xì)胞
　　三組動(dòng)物均可見(jiàn)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞，其中，sham組僅見(jiàn)少量的陽(yáng)性細(xì)胞。與sham組比較，后兩組腦挫傷灶周圍腦組織中TUNEL陽(yáng)性凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯升高，且DC+組（32.102±5.824）凋亡指數(shù)明顯低于DC-組（45.186±6.536），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　去骨瓣減壓術(shù)能夠上調(diào)Nrf2的活性，通過(guò)抑制caspase-3及caspase-12表達(dá)，發(fā)揮抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的神經(jīng)