西洋參對(duì)大鼠失神經(jīng)骨骼肌MuRF-1表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景:
　　 骨骼肌是周圍神經(jīng)系統(tǒng)的靶器官，其結(jié)構(gòu)和功能的維持都受到運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的支配和調(diào)節(jié)。失神經(jīng)支配后骨骼肌會(huì)發(fā)生不可逆性肌萎縮。失神經(jīng)骨骼肌萎縮是由于骨骼肌細(xì)胞的凋亡引起，早期骨骼肌細(xì)胞的凋亡主要是由于蛋白質(zhì)合成減少和蛋白質(zhì)降解增加導(dǎo)致，而蛋白質(zhì)降解增加又是主要的原因。泛素-蛋白酶體途徑在各型骨骼肌萎縮中發(fā)揮重要的作用，而其中泛素連接酶E3是這一途徑的關(guān)鍵酶。
　　 Bondine等首先在骨骼肌失神經(jīng)模型中發(fā)現(xiàn)了一

2、種與骨骼肌萎縮相關(guān)的泛素連接酶E3—肌肉環(huán)狀指基因1(muscle ring finger1，MuRFl)[2]。隨后Sacheck[3]等研究發(fā)現(xiàn)MuRF1表達(dá)在骨骼肌失神經(jīng)三天后明顯升高，在失神經(jīng)第七天時(shí)MuRF1表達(dá)仍然較高，到第十四天時(shí)才趨于正常。Cohen等發(fā)現(xiàn)在失神經(jīng)骨骼肌中，骨骼肌中的粗肌絲成份如MyBP（3天）、MyLC（7-10天）和MyHC（14天以后）只有在MuRF1存在的情況下才可以被有效地降解。而且將MuRF-

3、1鋅指結(jié)構(gòu)破壞后，失神經(jīng)骨骼肌蛋白降解的速率會(huì)大大減小(10％-30％)[4]，敲除MuRF-1基因的小鼠能有效地防止失神經(jīng)骨骼肌萎縮的發(fā)生。因此，MuRF-1可能在降解骨骼肌結(jié)構(gòu)蛋白方面起著十分重要的作用，有可能成為防治失神經(jīng)骨骼肌萎縮的新的靶點(diǎn)。
　　 西洋參從中醫(yī)角度來(lái)說(shuō)具有接骨續(xù)筋的功效，其主要活性成分就是人參皂苷。目前國(guó)內(nèi)外研究表明人參皂苷可以延緩失神經(jīng)骨骼肌萎縮，但其延緩肌萎縮的機(jī)制目前還不清楚。既然MuRF-1在降

4、解骨骼肌中起重要作用，那么西洋參是否可以通過(guò)影響MuRF-1的表達(dá)來(lái)延緩失神經(jīng)骨骼肌萎縮呢？目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。本研究為了明確西洋參對(duì)MuRF-1表達(dá)和失神經(jīng)肌萎縮的影響，設(shè)計(jì)了本課題。
　　 目的:
　　 觀察西洋參對(duì)失神經(jīng)大鼠骨骼肌MuRF-1表達(dá)的影響，并探討其延緩失神經(jīng)骨骼肌的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 雌性成年健康Wistar大鼠54只，隨機(jī)分為3組:假神經(jīng)組(A組，6只)、失神經(jīng)組（B組，

5、24只）、西洋參治療組（C組，24只）。A組大鼠用10％水合氯醛麻醉后僅暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)，未作處理，被記錄為0d。B、C組大鼠麻醉后暴露并切斷右側(cè)坐骨神經(jīng)，兩斷端翻轉(zhuǎn)180°后縫合于肌膜上[6]，做失神經(jīng)腓腸肌模型。然后B組大鼠用生理鹽水3ml/d，灌胃，C組大鼠用西洋參8片/d，溶于3ml生理鹽水，1次/d，灌胃。分別于術(shù)后2、7、14、28d處死6只大鼠，分離并取出大鼠右側(cè)腓腸肌標(biāo)本。 HE染色觀察腓腸肌組織形態(tài)學(xué)改變;用Real-

6、time-PCR法檢測(cè)MuRF-1 mRNA表達(dá);用Western blot方法測(cè)定MuRF-1蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)組織HE染色分析結(jié)果:假神經(jīng)組肌纖維束完整;失神經(jīng)組與假神經(jīng)組比較，肌纖維束變細(xì)、肌束間隔增寬，隨失神經(jīng)時(shí)間延長(zhǎng)而變化越明顯;治療組與失神經(jīng)組比較，肌纖維及肌束間隔改變有所減輕。
　　 (2) Real-time PCR結(jié)果顯示失神經(jīng)組MuRF-1 mRNA表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)明顯高于假

7、神經(jīng)組(P＜0.05)，且在失神經(jīng)第2d達(dá)到峰值，而后緩慢下降，28d基本達(dá)到正常水平。西洋參組MuRF-1的mRNA表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均明顯低于失神經(jīng)組(P＜0.05)。
　　 (3) Western blot結(jié)果顯示失神經(jīng)組MuRF-1蛋白表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)明顯高于假神經(jīng)組(P＜0.05)，且在失神經(jīng)第2d達(dá)到峰值，而后緩慢下降，28d基本達(dá)到正常水平。西洋參組MuRF-1的蛋白表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均明顯低于失神經(jīng)組(P＜0.05)。