肌衛(wèi)星細(xì)胞失神經(jīng)骨骼肌種植治療肌萎縮的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞種植對(duì)在體失神經(jīng)骨骼肌萎縮的影響.研究肌衛(wèi)星細(xì)胞對(duì)萎縮肌肉的作用,為臨床提高治療失神經(jīng)肌萎縮的療效提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:采用I型膠原酶和胰蛋白酶兩步消化法獲取大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,不連續(xù)密度梯度離心法純化后,體外原代培養(yǎng),并運(yùn)用頻繁傳代的方法獲取足量單個(gè)肌衛(wèi)星細(xì)胞.利用免疫細(xì)胞化學(xué)染色對(duì)所獲取的細(xì)胞進(jìn)行鑒定,為移植做準(zhǔn)備.取成年SD大鼠共32只雌雄不限,隨機(jī)分為2組,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組各16只,兩組均采用切斷大鼠右后肢坐

2、骨神經(jīng)造成1cm神經(jīng)缺損,形成失神經(jīng)支配腓腸肌的動(dòng)物模型.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組分別取肌衛(wèi)星細(xì)胞懸液,生理鹽水各0.2ml,注入失神經(jīng)支配腓腸肌內(nèi),移植前一天以0.02％濃度4′-6-二脒基-2-苯吲哚(DAPI)熒光標(biāo)記肌衛(wèi)星細(xì)胞過(guò)夜.實(shí)驗(yàn)后2周、8周時(shí)取雙側(cè)腓腸肌測(cè)定肌濕重,然后行肌動(dòng)蛋白免疫組織化學(xué)染色及HE染色,并作圖像分析測(cè)定肌纖維橫截面積及肌動(dòng)蛋白的表達(dá)量,數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS10.0軟件處理,進(jìn)行兩組樣本均數(shù)比較t檢驗(yàn).結(jié)論:肌衛(wèi)星細(xì)胞