RNA干擾MuRF1基因延緩大鼠失神經(jīng)骨骼肌萎縮.pdf

1、目的：
　　研究通過慢病毒轉(zhuǎn)染RNAi技術(shù)介導(dǎo)的Muscle RING finger1（MuRF1）基因阻斷或下調(diào)來延緩大鼠喪失神經(jīng)后出現(xiàn)的骨骼肌萎縮的療效。為臨床上因失去神經(jīng)支配導(dǎo)致骨骼肌發(fā)生萎縮問題的研究及治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　日齡為43-55天，選種屬為SD大鼠，稱空腹重量為192-202g的大鼠40只，隨機(jī)分為注射50μL重組慢病毒載Lenti．GFP-MuRF1（即注射干擾基因組）實(shí)驗(yàn)組共計(jì)20

2、只，和注射Lenti．GFP溶液50μL（即注射空載體組）對(duì)照組20只。切斷并翻轉(zhuǎn)縫合大鼠左側(cè)髖部處的坐骨神經(jīng)，制造左趾長伸肌喪失神經(jīng)支配的模型。造模型后按組別于失神經(jīng)趾長伸肌注射干擾基因與空載體量均為50μL，注射后滿一周與三周時(shí)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩組大鼠分別取6只，完整顯露起止點(diǎn)后切除左側(cè)趾長伸肌，于熒光顯微鏡下觀察綠色熒光信號(hào)。分別于二百倍顯微鏡與2萬倍電鏡觀察肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，檢測肌肉總蛋白含量，測肌肉濕重維持率，實(shí)時(shí)定量PCR檢測Mu

3、RF1基因，比較不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠趾長伸肌肌細(xì)胞橫截面積。
　　結(jié)果：
　　轉(zhuǎn)染后1和3周，兩組趾長伸肌中均可觀察到大量GFP熒光信號(hào)。轉(zhuǎn)染后1周實(shí)驗(yàn)組的肌濕重維持率、肌細(xì)胞橫截面積、趾長伸肌肌肉總蛋白含量分別為(90.87±4.56)％、(943.53±24.27)μ㎡和(94.18±2.53)(mg／mL)均明顯高于對(duì)照組(75.73±6.21)%、(753.43±23.41)μ㎡和(72.54±2.45)(mg／mL)，

4、差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P均<0．05)。RT-PCR檢測實(shí)驗(yàn)組MuRF1基因與對(duì)照組相比明顯下調(diào)（P<0.05）。轉(zhuǎn)染后3周，上述各指標(biāo)分別為（84.37±6.24）%、（851.30±20.34）μ㎡和（81.37±2.84)(mg／mL)，仍高于對(duì)照組，對(duì)照組各指標(biāo)為（50.42±5.01）%、（643.75±21.90）μ㎡（59.72±3.62)(mg／mL)（P均<0.05）。超微結(jié)構(gòu)顯示，術(shù)后1周實(shí)驗(yàn)組退變的細(xì)胞核均少于對(duì)照