Hhcy對腦缺血再灌注損傷影響的實驗研究.pdf

1、目的：探討高同型半胱氨酸血癥(hyperhomocysteinemia，Hhcy)對腦缺血再灌注損傷的影響及可能存在的病生理機制。 方法：健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠78只，按體重隨機分兩組：Hhcy組和對照組，每組各39只，分別給予高蛋氨酸飼料和普通飼料喂養(yǎng)12周，依據(jù)血漿總同型半胱氨酸水平作為判定Hhcy模型制備成功的標準。行大腦中動脈閉塞術(shù)建立大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型，缺血時間分別為1h、2h、4h

2、，再灌注時間均為24h。將缺血1h、2h、4h再灌注24h不同時間窗的各亞組分別冠名為A組、B組、C組，每組13只。再灌注后對大鼠進行神經(jīng)行為缺損評分，測量并計算腦梗死體積，對血清超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱苷肽過氧化物酶水平進行檢測，行HE染色觀察腦組織病理改變，脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導的缺口末端標記法染色后光鏡下觀察凋亡細胞。 結(jié)果： 1.實驗0周及12周測定血漿tHcy水平，0周時Hhcy組(9.33±2.17

3、μmol/L)，對照組(9.15±2.29μmol/L)，tHcy水平無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；12周時Hhcy組(22.77±3.12μmol/L)，對照組(9.10±2.26μmol/L)，tHcy水平有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；tHcy水平Hhcy組12周較0周升高，而對照組12周較0周時無變化。 2.對腦缺血再灌注后Hhcy組和對照組大鼠進行神經(jīng)行為缺損評分，結(jié)果顯示Hhcy組分值為A組(10.44±0.72)，B

4、組(9.88±0.64)，C組(9.30±0.95)，分別低于相應對照組A組(11.56±1.23)，B組(10.60±0.69)，C組(10.33±0.71)，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Hhcy組和相應對照組分值差值A組(1.11±0.13)，B組(0.77±0.23)，C組(1.03±0.26)經(jīng)分析無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 3.Hhcy組大鼠各組腦梗死體積分別為A組(43.41±5.29mm3)，B組(78.59

5、±4.23mm3)，C組(125.54±8.48mm3)，對照組分別為A組(33.86±7.33mm3)，B組(61.52±6.77mm3)，C組(91.60±4.7mm3)，Hhcy組較相應對照組腦梗死體積增加(均P<0.05)；Hhcy組和對照組大鼠腦缺血再灌注模型腦梗死體積差值分別為A組(9.62±2.81mm3)，B組(17.07±2.65mm3)，C組(33.53±4.71mm3)，此差值隨缺血時間的延長而增大(P<0.05)

6、。 4.Hhcy組大鼠各組SOD水平分別為A組(276.03±55.44U/ml)，B組(224.33±31.95U/ml)，C組(176.34±39.12U/ml)，對照組SOD水平分別為A組(338.72±29.06U/ml)，B組(314.75±47.52U/ml)，C組(290.48±17.32U/ml)，對兩組進行比較后發(fā)現(xiàn)Hhcy組分別較相應對照組SOD水平降低(均P<0.05)。Hhcy組和對照組各組大鼠腦缺血再灌

7、注模型的SOD水平差值分別為A組(62.71±39.30U/ml)，B組(90.92±40.01U/ml)，C組(114.03±34.33U/ml)，3組差值間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 5.Hhcy組大鼠各組MDA水平分別為A組(11.92±1.75nmol/ml)，B組(17.45±6.22nmol/ml)，C組(23.66±5.26nmol/ml)，對照組MDA水平分別為A組(5.71±2.75nmol/ml)，B組(

8、7.02±2.35nmol/ml)，C組(10.21±3.23nmol/ml)，對兩組結(jié)果分析后顯示Hhey組大鼠A、B、C組分別較相應對照組MDA水平升高(均P<0.05)。Hhcy組和相應各對照組大鼠腦缺血再灌注模型的MDA水平差值分別為A組(6.27±3.93nmol/ml)，B組(9.09±4.00nmol/ml)，C組(11.40±3.43nmol/ml)，3組差值間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 6.Hhcy組大鼠各

9、組GSH-PX水平分別為A組(694.54±85.42)酶活力單位，B組(417.94±74.82)酶活力單位，C組(412.01±104.41)酶活力單位，對照組GSH-PX水平分別為A組(1140.13±151.10)酶活力單位，B組(933.70±296.15)酶活力單位，C組(927.49±185.63)酶活力單位，經(jīng)統(tǒng)計學分析后結(jié)果表明Hhcy組大鼠A、B、C組分別較相應對照組GSH-PX水平降低(均P<0.05)。而Hhcy

10、組和對照組A、B、C組大鼠腦缺血再灌注模型的GSH-PX水平差值A組為(445.59±193.23)酶活力單位，B組為(516.45±202.31)酶活力單位，C組為(516.69±123.25)酶活力單位，差值間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 7.HE染色后光鏡下觀察Hhcy組大鼠較相應對照組一側(cè)皮層軟化灶明顯增大，組織疏松、細胞核固縮、消失，數(shù)量減少，細胞及血管周圍間隙明顯擴大。 8.TUNEL染色后觀察單位視野下核