大苞萱草與‘原諒’萱草及其雜交后代優(yōu)選單株的類胡蘿卜素分析.pdf

1、本文以大苞萱草（Hemerocallis middendorfii Trautv.et Mey.）花瓣為試驗(yàn)材料，建立一種基于UPCC-MS的萱草花瓣中類胡蘿卜素的最佳提取方法、檢測(cè)條件及鑒定方法，并以大苞萱草和‘原諒’萱草(H.‘Pardon Me’)花瓣作為黃色和紅色兩種花色的代表，分析不同顏色萱草花瓣中類胡蘿卜素組成和含量的差別。同時(shí)，以大苞萱草和‘原諒’萱草為親本進(jìn)行雜交，從雜交后代中篩選出優(yōu)良單株，對(duì)其花瓣進(jìn)行類胡蘿卜素分析，

2、比較雜交后代中類胡蘿卜素種類和含量與兩親本的差別。旨在對(duì)萱草屬植物花色成因進(jìn)行探究，并為萱草屬植物育種工作提供理論支持。結(jié)果表明:
　　1.對(duì)類胡蘿卜素樣品的提取方法進(jìn)行了篩選，分別設(shè)置了五種提取試劑、兩種振蕩方法和兩種皂化方法，對(duì)不同組合的提取效果進(jìn)行了比較。三個(gè)因子對(duì)結(jié)果均有顯著影響，在提取試劑的選擇中，提取試劑B丙酮∶正己烷(3∶5/V∶V)和D乙酸乙酯∶正己烷(1∶1/V∶V)提取的類胡蘿卜素總量較高，分別為56.37 m

3、g/g和53.92 mg/g;在震蕩方法的選擇中，溫控?fù)u床振蕩的方法提取總量較高，為56.43 mg/g;在皂化方法的選擇中，常溫皂化16h提取的類胡蘿卜素總量較高，為53.73 mg/g;在三種因子的交互作用中，提取試劑與震蕩方法兩種因子的交互作用顯著，提取試劑B丙酮∶正己烷(3∶5/V∶V)與溫控?fù)u床振蕩提取的組合提取總量最高，為67.32 mg/g。依據(jù)類胡蘿卜素對(duì)高溫敏感的特性，最終確定，提取試劑B丙酮∶正己烷(3∶5/V∶V)

4、、溫控?fù)u床振蕩提取、常溫皂化16h為最佳提取組合，作為類胡蘿卜素的檢測(cè)和結(jié)構(gòu)鑒定的前期樣品制備方法。
　　2.所得類胡蘿卜素樣品用UPCC-MS方法進(jìn)行分離和檢測(cè)，并對(duì)兩種流動(dòng)相夾帶劑和三種洗脫梯度的洗脫效果進(jìn)行比較。其中，流動(dòng)相夾帶劑分別選擇甲醇和乙醇，洗脫梯度設(shè)置為等度洗脫和兩種梯度洗脫。等度洗脫條件:20％B，洗脫時(shí)間10 min。梯度洗脫條件一:0 min，5％ B;5 min，25％ B;6 min，30％ B;8 mi

5、n，5％ B;10min，5％B。梯度洗脫條件二:0 min，5％ B;5 min，20％ B;7 min，20％ B;8 min，5％ B;10 min，5％B。通過色譜圖中色譜峰數(shù)量及分離度對(duì)比，確定最佳檢測(cè)條件為:流動(dòng)相夾帶劑為乙醇，且洗脫梯度為0 min，5％ B;5 min，20％ B;7 min，20％B;8 min，5％B;10 min，5％B。在該檢測(cè)條件下，色譜圖峰型和同分異構(gòu)體的分離效果達(dá)到最佳。
　　3.對(duì)大

6、苞萱草與‘原諒’萱草花瓣中的類胡蘿卜素進(jìn)行了提取、分離和測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果顯示，黃色和紅色兩種不同顏色的萱草花瓣中類胡蘿卜素在種類和含量上均具有較大差別。在類胡蘿卜素種類上，大苞萱草花瓣中含有16種類胡蘿卜素，‘原諒’萱草花瓣中含有18種，前者中含有的兩個(gè)zeaxanthin的同分異構(gòu)體在后者中未檢測(cè)到，而后者中檢測(cè)出的violaxanthin、all-tr ans-neox anthin和5，6-epoxy-β-carotene在前者中未

7、發(fā)現(xiàn);在含量上，大苞萱草花瓣中類胡蘿卜素總量為126.38 mg/g，‘原諒’萱草花瓣中類胡蘿卜素總量為115.36 mg/g，兩者含量最高的均為all-trans-β-carotene，而含量最低的種類前者為dihydrolutein，后者為dihydrolutein和lutein。
　　4.通過大苞萱草與‘原諒’萱草的雜交試驗(yàn)，獲得114株實(shí)生苗，雜交后代花瓣顏色表現(xiàn)均介于兩親本之間，且大部分顯示橘紅色。在雜交后代中篩選出兩個(gè)

8、綜合性狀表現(xiàn)良好、花色均勻穩(wěn)定且具代表性的優(yōu)良單株46號(hào)和84號(hào)，對(duì)兩個(gè)單株花瓣的內(nèi)瓣和外瓣四個(gè)樣品分別進(jìn)行類胡蘿卜素的測(cè)定，結(jié)果表明，子代與親本之間、同株花的內(nèi)瓣和外瓣兩個(gè)部位之間，所含類胡蘿卜素的種類和含量均存在一定差別。在種類上，子代四個(gè)樣品中并未發(fā)現(xiàn)親本中沒有的類胡蘿卜素種類，且在種類數(shù)量上與親本相同或少于親本，其中46號(hào)植株內(nèi)層花瓣的類胡蘿卜素種類最少，為14種;子代四個(gè)樣品中，同株花的內(nèi)、外瓣種類更為相近。在含量上，四個(gè)樣品