功能性消化不良發(fā)病的分子機制研究.pdf

1、第一部分上海人群中GNB3基因多態(tài)性和功能性消化不良的相關性研究 目的：研究上海人群中GNB3基因多態(tài)性和功能性消化不良(FD)之間的相關性。 方法：功能性消化不良患者102例，均來自上海仁濟醫(yī)院消化內科門診，根據(jù)羅馬II標準入選，其中幽門螺桿菌(Hp)陽性56例，陰性46例；健康對照142例，來自上海仁濟醫(yī)院體檢中心，其中Hp陽性85例，陰性57例?；颊吲c健康對照年齡和性別匹配。從外周血白細胞中抽提基因組DNA，用PC

2、R-RFLP方法檢測GNB3基因C825T、C1429T和G(-350)A三個位點的基因型。用)x<’2>檢驗比較GNB3基因型在。FD患者和健康對照組之間的分布、GNB3基因型在FD亞型中的分布以及在Hp陽性/陰性患者和Hp陽性/陰性健康對照之間的分布；用Kruskal-Wallis檢驗分析癥狀積分與基因型之間的關系；以年齡、性別、Hp感染等作為協(xié)變量，用Logistic回歸分析GNB3基因型與FD之間的關系。應用的統(tǒng)計軟件為SAS

3、9.0及SPSS 13.0，顯著性水平均為P<0.05。 結果：C825T基因型在FD患者和健康對照組中的分布分別是21 CC，41 CT，40 TT和38 CC.55 CT，49 TT(P>0.05)；C1429T基因型在兩組中的分布分別為66 CC，33 CT，3 TT和104 CC，31 CT，7 TT(P＞0.05)；G(-350)A基因型的分布情況為：FD患者組10 AG和92 GG，健康對照組5 AG和137 GG

4、，兩組中均未發(fā)現(xiàn)從基因型。C825T和C1429T基因型的分布在FD患者和健康對照之間不存在顯著性差異(P>0.05)；而G(-350)A中等位基因A在FD患者中出現(xiàn)的頻率顯著高于健康對照組(P<0.05)，在Hp陽性患者和Hp陽性健康對照之間相比，上述關系依然成立；在Hp陰性患者和Hp陰性健康對照之間，G(-350)A基因型的分布不存在差異。FD癥狀積分在三個位點的各基因型之間均無顯著性差異。L0gistic回歸分析表明，GNB3基因

5、C825T和C1429T基因多態(tài)性不與FD的發(fā)病相關(0R分別為0.69和2.11，95％C1分別為0.39-1.22和0.49-9.05)，而G(-350)A多態(tài)性的等位基因A與FD的發(fā)病相關(0R=0.47，95％CI=0.26-0.86)。 結論：在上海人群中，GNB3基因C825T多態(tài)性和C1429T多態(tài)性均不是FD發(fā)病的危險因子；GNB3基因(-350)位點有等位基因A攜帶者為FD易感人群，GNB3(-350)A是在

6、Hp感染的基礎上誘發(fā)FD癥狀的一個因素。但是GNB3基因多態(tài)性與FD癥狀積分之間不存在相關性。 第二部分 GNB3基因多態(tài)性對G蛋白β3亞基mRNA及蛋白表達的影響 目的：通過比較不同GNB3825-1429基因型的GIB3mRNA及蛋白的表達情況，分析GNB3基因C825T和C1429T基因多態(tài)性對該基因第9個外顯子選擇性剪接的影響。 方法：取胃手術標本胃粘膜，共32例。抽提基因組DNA，經PCR-RFLP法

7、檢測C825T和C1429T基因型后，按照GNB3825-1429基因型分為6組。抽提胃粘膜組織中的RNA和總蛋白，設計擴增片斷跨越GNB3基因第9個外顯子的引物，以T-PCR法檢測6組胃粘膜組織中G蛋白p3亞基mRNA的表達情況；然后用Westem-blot法檢測6組胃粘膜的G蛋白p3亞基蛋白表達情況。 結果：6種GNB3825-1429基因型的mRNA片段大小相同，均只有485bp的大片段，而未見到362bp小片段的剪接體；

8、各基因型的蛋白質表達情況也相同，只出現(xiàn)了37.2kD的Gβ3，而無32.8kDa的Gβ3s。 結論：GNB3基因C825T和1429T兩個位點的基因多態(tài)性均不影響第9個外顯子的選擇性剪接，因此這兩個位點的基因多態(tài)性不影響Gp3s的表i大。 第三部分功能性消化不良患者胃神經功能改變的研究 目的：通過對胃粘膜中降鈣素基因相關肽(CGRP)陽性神經元和肥大細胞數(shù)量在幽門螺桿菌(Hp)陽性功能性消化不良(FD)患者根除H

9、p前后的比較，以及在Hp陽性FD患者和Hp陰性FD患者之間的比較，分析CGRP和肥大細胞在FD發(fā)病中的作用。 方法：Hp陽性FD患者16例，Hp陰性FD患者20例，根據(jù)羅馬II標準入選，年齡和性別匹配。所有患者均接受胃鏡檢查并行胃竇粘膜活檢，其中Hp陽性FD患者在根除Hp治療后一年復查胃鏡及胃粘膜活檢，按新悉尼系統(tǒng)標準行胃炎診斷。用免疫組化染色法檢測胃粘膜組織中CGRP陽性神經元和肥大細胞的分布情況，在光鏡下觀察并計數(shù)每高倍視野

10、下的陽性細胞數(shù)量。用方差分析(one-way ANOVA)比較Hp根除前、根除后和Hp陰性三組患者的胃粘膜炎癥程度和癥狀評分，以及胃粘膜CGRP陽性神經元和肥大細胞的數(shù)量。所用統(tǒng)計軟件為SPSSl3.0，顯著性水平為P<0.05。 結果：Hp根除前、根除后llHp陰性三組患者的胃粘膜炎癥程度評分分別為4.1±0.7(n=16)、2.1±0.8(n=16)和 1.5±0.5(n=20)，癥狀評分分別為13.6±1.3(n=16)

11、、11.9±1.2(n=16)和12.9±1.7(n=20)；每高倍視野下CGRP陽性神經元計數(shù)分別為：3.7±1.7(n=1 6)、2.8±1.1(n=1 6)和 1.7±0.7(n=20)，肥大細胞計數(shù)分別為：15.0±3.1(n=16)、13.0±2.4(n=16)和19.7±2.9(n=20)。Hp根除后與根除前相比，胃粘膜炎癥程度和癥狀均明顯減輕(P<0.05)，胃粘膜CGRP陽性神經元的數(shù)量顯著減少(P<0.05)，而肥大細

12、胞計數(shù)無顯著改變(P>0.05)；HpN性組與Hp根除前或根除后相比，胃粘膜炎癥程度明顯輕于后兩者(P