復(fù)方多維骨松片的研制及相關(guān)藥效學(xué)研究.pdf

1、1.研究背景及目的 骨質(zhì)疏松癥是以骨量減少，骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化為特征并導(dǎo)致骨脆性增加，易于骨折的一種全身性的骨代謝疾病。健康的年輕人群中，骨重建單元的骨轉(zhuǎn)換率保持恒定，形成平衡，即破骨細(xì)胞的骨吸收作用與成骨細(xì)胞的骨形成作用幾乎相等。如果破骨細(xì)胞骨吸收作用強(qiáng)于成骨細(xì)胞的骨形成作用，將使骨代謝呈負(fù)平衡狀態(tài)，導(dǎo)致骨量降低，骨組織微結(jié)構(gòu)退變，形成骨質(zhì)疏松。婦女絕經(jīng)后因卵巢功能下降、雌激素不足、骨丟失增加而引起的骨質(zhì)疏松稱為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松

2、癥。由于婦女的骨峰值較男性低，同時(shí)婦女在絕經(jīng)后骨丟明顯加速，停經(jīng)15-20年的婦女有可能丟失其全身骨骼總量的30%，因此絕經(jīng)婦女容易患骨質(zhì)疏松癥。研制一種治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的新藥，該藥物由四種成分組成，碳酸鈣，維生素D3，大豆異黃酮，阿侖膦酸鈉等。碳酸鈣補(bǔ)充鈣量，調(diào)節(jié)骨代謝，促進(jìn)骨形成；維生素D3能促進(jìn)腸道對(duì)鈣的吸收以及腎臟對(duì)鈣的重吸收，抑制骨吸收，促進(jìn)骨細(xì)胞分化而增加骨量；大豆異黃酮是植物雌激素，具有改善婦女更年期綜合癥狀，抑制婦女

3、絕經(jīng)后骨量快速丟失的作用；阿侖膦酸鈉有抑制骨吸收，增加骨量，降低骨折率并緩解骨痛，而且能提高骨密度外，還有增加骨礦物質(zhì)含量的作用。四種主要成分分別作用于引起絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松的不同環(huán)節(jié)，將四種治療骨質(zhì)疏松的成分制成復(fù)方片劑，有效治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥，方便患者服用，增加患者服用的順應(yīng)性。通過大鼠去卵巢骨質(zhì)疏松模型的建立，觀察單純鈣劑（含維生素D3）、鈣劑加大豆異黃酮、鈣劑加大豆異黃酮及阿侖膦酸鈉等幾種給藥方式對(duì)骨質(zhì)疏松模型的影響，探討

4、復(fù)方制劑的藥效。 2.方法 2．1復(fù)方多維骨松片的制備及含量測(cè)定 采用打粉，壓片等方法制備了含有4種有效成分的復(fù)方骨松片。通過與標(biāo)準(zhǔn)品比較，采用高效液相儀色譜儀測(cè)定維生素D3、大豆異黃酮含量，采用分光光度比色法測(cè)定阿侖膦酸鈉含量。并測(cè)試最終產(chǎn)品的硬度，脆性，崩解性，質(zhì)量均一性等指標(biāo)，控制產(chǎn)品質(zhì)量使其達(dá)到臨床使用標(biāo)準(zhǔn)。 2．2復(fù)方多維骨松片的藥效學(xué)研究 40只SD雌性成年大鼠，隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組

5、，去卵巢組，去卵巢（給維生素D3+碳酸鈣即A組），去卵巢（給維生素D。+碳酸鈣組+大豆異黃酮即B組），去卵巢（給維生素D3+碳酸鈣組+大豆異黃酮組+阿侖膦酸鹽即C組）。假手術(shù)組模擬手術(shù)過程，但不切除卵巢。去卵巢組將雙側(cè)卵巢完全切除。手術(shù)后第3周開始給藥，喂養(yǎng)2月后將動(dòng)物處死，采血，測(cè)量Ca、血清堿性磷酸酶（ALP）等生化指標(biāo)。取左側(cè)股骨，測(cè)量股骨骨密度（BMD）。將股骨固定，脫鈣，包埋，切片后，HE染色，觀察骨切片病理改變。分析各藥物組

6、方對(duì)大鼠骨質(zhì)疏松的影響。 2．3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本論文中的所有數(shù)據(jù)均采用SPSS10．0進(jìn)行分析。多組間比較采用單向方差分析（One-way ANOVA），各組均數(shù)的多重比較采用最小顯著差值法（least significant different，LSD）；不滿足方差齊性要求是，采用Dunnett's T3法。 3.結(jié)果 3．1制劑制備結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)采用打粉，壓片等方法成功制備了含有4種有效成分的復(fù)方

7、多維骨松片。大豆異黃酮、阿侖膦酸鈉、碳酸鈣、維生素D3按等量遞加法過篩混合，加入粘合劑制軟材，干顆粒過篩后，用旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)壓片成型。整個(gè)工藝按照標(biāo)準(zhǔn)流程操作，采用過程質(zhì)量控制獲得最終產(chǎn)品。將產(chǎn)品進(jìn)行物性質(zhì)量檢測(cè)和有效成分測(cè)定，對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估。通過質(zhì)量檢測(cè)，藥片硬度適中，色澤均勻，外觀光潔，質(zhì)地均一，脆性，崩解性等物性指標(biāo)均達(dá)到臨床用藥標(biāo)準(zhǔn)。進(jìn)一步的藥物活性成分檢測(cè)表明，復(fù)方藥片的大豆異黃酮，阿侖膦酸鹽，維生素D3等活性成分的含量均達(dá)到標(biāo)

8、準(zhǔn)。 3．2藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3．2．1血清生化指標(biāo) 各組大鼠股骨生化指標(biāo)Ca和ALP測(cè)定結(jié)果：ALP含量，與空白對(duì)照組相比，除了A組無顯著性差異外（P>0．05），其他各組均有顯著性差異（P<0．01）；和去卵巢組相比，給藥的A，B，C，三組均有顯著差異（P<0．01）；B，C組和A組比較有顯著差異（P<0．01），而B，C組之間無顯著差異（P>0．05）。 Ca含量，與空白對(duì)照組相比，除了A組無顯著性

9、差異外（P>0．05），其他各組均有顯著性差異（P<0．05）；和去卵巢組相比，給藥的A，B，C，三組均有顯著差異（P<0．01）；B組和A組比較有顯著差異（P<0．05），而B，C組之間無顯著差異（P>0．05）。 結(jié)果表明：與正常對(duì)照組相比，大鼠去卵巢后，血Ca水平下降。血液ALP水平升高，表明骨代謝增強(qiáng)，骨轉(zhuǎn)化速率加快。與去卵巢組比較，三個(gè)給藥組都有療效，而B，C組療效較高。 3．2．2大鼠股骨骨干密度 各

10、組大鼠股骨骨密度測(cè)量結(jié)果（表3-3）：與空白對(duì)照組相比，除了A組無顯著性差異外（P>0．05），其他各組均有顯著性差異（P<0．05）；和去卵巢組相比，給藥的A，B，C，三組均有顯著差異（P<0．05）；B，C組和A組比較有顯著差異（P<0．05），而B，C組之間無顯著差異（P>0．05）。 結(jié)果表明：與假手術(shù)組相比，大鼠去卵巢后，其骨組織的骨密度下降。三個(gè)給藥組與去卵巢模型組比較骨密度均有所升高。其中A組骨密度水平和假手術(shù)組相

11、當(dāng)，而B，C組骨密度水平甚至高過假手術(shù)組，表明B，C組療效高于A組。 3．2．3大鼠股骨頭病理觀察及測(cè)量結(jié)果 病理切片觀察發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組的大鼠骨小梁厚度均勻，結(jié)構(gòu)清晰。去卵巢組大鼠骨小梁稀松，骨細(xì)胞數(shù)量減少，小梁間隔明顯寬大。給藥組A小梁厚度有所增加，但與假手術(shù)組比較仍顯稀薄。給藥組B大鼠骨小梁厚度明顯增加，骨細(xì)胞數(shù)量增加，小梁間隔變小，骨質(zhì)改善。給藥C組與給藥B組顯微形態(tài)類似。 4.結(jié)論 4．1通過本實(shí)

12、驗(yàn)。我們初步成功制備了質(zhì)地均一，硬度、崩解度、脆性等理化指標(biāo)復(fù)合臨床應(yīng)用要求的復(fù)方多維骨松片。其中的大豆異黃酮，阿侖膦酸鹽，維生素D3等活性成分的含量均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。 4．2單純補(bǔ)充鈣劑治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥難以獲得理想效果； 4．3將鈣劑與大豆異黃酮組成復(fù)方制劑，可以達(dá)到“細(xì)胞補(bǔ)鈣”的效果，較好的發(fā)揮骨質(zhì)疏松的防治效果。 4．4將鈣劑+大豆異黃酮+阿侖膦酸鹽組成復(fù)方制劑是一種較好的理論設(shè)想，但由于藥物之間的相互作用可