桑葉降血糖有效組分的提取分離純化工藝研究.pdf

1、桑葉為?？浦参锷orus alba L.的干燥葉，具有清肝明目、疏風清熱之功效。古代有記載桑可用于治療消渴癥，即現(xiàn)代的糖尿病。近年來，桑葉的降血糖活性受到眾多學者的廣泛關注和研究。本課題組前期已對桑葉中降血糖活性的物質(zhì)進行了系統(tǒng)研究，其降血糖有效組分主要為多糖、黃酮和生物堿類成分。本論文研究了不同季節(jié)桑葉中1-脫氧野尻霉素(DNJ)、總黃酮、蘆丁和多糖含量的變化規(guī)律。采用現(xiàn)代提取分離技術對桑葉總黃酮和生物堿的提取分離純化工藝進行研究。

2、運用現(xiàn)代分析技術對生物堿部位中的主要成分進行了分析。主要研究內(nèi)容和結論如下：
　　1、建立了DNJ、蘆丁、總黃酮及多糖的含量分析方法。建立了柱前衍生化-高效液相色譜紫外檢測法分析桑葉中DNJ含量；高效液相色譜紫外檢測法分析桑葉中蘆丁的含量；紫外分光光度法分析桑葉中總黃酮和多糖的含量。方法快速、靈敏、準確。
　　系統(tǒng)研究了不同生長季節(jié)桑葉中DNJ、蘆丁、總黃酮和多糖的含量動態(tài)變化。結果表明，不同生長季節(jié)的桑葉中DNJ、蘆丁、總

3、黃酮和多糖的含量均有一定差異，且4種成分的變化趨勢各有差異。桑葉中DNJ含量在7、8月份最高，達到0.27％?？傸S酮含量變化趨勢同蘆丁一致，即從4月開始下降，6月下旬后升高，經(jīng)霜后含量顯著升高，11月份含量最高。多糖含量從4月份開始逐漸升高，到10月中旬達到2.32％，之后持續(xù)下降，尤其是在11月中下旬含量急劇降低。
　　2、研究了桑葉總黃酮的提取分離純化工藝。以桑葉總黃酮得率為指標，考察了乙醇濃度、提取溫度、提取時間、提取次數(shù)和

4、料液比對總黃酮提取效果的影響，優(yōu)選出桑葉總黃酮最佳提取工藝為：20倍生藥量的60％乙醇100℃提取2次，每次2.5h。
　　以樹脂對總黃酮吸附量為考察指標，對樹脂進行篩選，得到樹脂V的吸附性能最優(yōu)。研究了樹脂的靜態(tài)吸附性能，樹脂對桑葉總黃酮的靜態(tài)吸附容量為18.70mg/g濕樹脂，靜態(tài)解吸率為92.73％?？疾炝藰渲膭討B(tài)吸附性能，樹脂的動態(tài)吸附容量為16.49 mg/g濕樹脂，動態(tài)解析率為92.78％。桑葉總黃酮最佳分離純化工藝

5、為：上樣量1:3(樹脂：生藥量)，樹脂吸附流速6BV/h，乙醇濃度為60％，60％乙醇洗脫體積為3BV。經(jīng)兩步純化后得到總黃酮部位中總黃酮的含量能夠達到50％以上。
　　3、研究了桑葉生物堿的提取分離純化工藝。采用單因素實驗和正交實驗，以DNJ得率為考察指標，優(yōu)選出桑葉生物堿的最佳提取工藝：16倍量蒸餾水100℃提取3次，每次1h。DNJ得率為1.76 mg/g。
　　采用離子交換樹脂對桑葉中DNJ提取物進行分離和純化。確定

6、生物堿最佳純化工藝為：001×7陽離子交換樹脂上樣量1:3(樹脂量：生藥量)，樹脂吸附流速3mL/min，氨水濃度0.5mol/L，氨水洗脫體積6倍柱體積(6BV)；201×4陰離子交換樹脂上樣量1:3(樹脂量：生藥量)，樹脂吸附流速4mL/min。通過最佳純化工藝得到DNJ純度大于50％的桑葉總生物堿部位。
　　4、桑葉生物堿部位主要成分分析及總生物堿含量測定。采用液-質(zhì)聯(lián)用技術(LC-MS)對桑葉總生物堿部位中主要成分進行分析

7、，鑒定了6個主要的活性成分的結構，其中5個多羥基生物堿：DNJ、fagomine、3-epi-fagomine、DAB、CalystegineB2，1個多羥基生物堿糖苷：2-O-β-Glc-DAB。
　　柱前衍生化HPLC-UV法測定桑葉生物堿部位中總生物堿的含量，流動相為乙腈-0.1％醋酸(50:50，V/V)，最低檢出限為3.3ng，標準曲線為Y=13458X-4708.1(相關系數(shù)r=0.9999)，線性范圍為31.75～5

8、08μg/mL，平均回收率為98.68％，測得樣品的總生物堿平均含量為76.87％；柱前衍生化HPLC-FP法測定桑葉生物堿部位中總生物堿的含量，流動相為乙腈－0.1％醋酸(50:50，V/V)，最低檢出限0.4ng，回歸方程為Y=33301X+3312.4(相關系數(shù)r=0.9999)，線性范圍為31.75-508μg/mL，平均回收率為99.02％，測得樣品的總生物堿平均含量為76.70％；雷氏鹽比色法測定桑葉生物堿部位中總生物堿的含