河豚毒素的提取和分離純化工藝研究.pdf

1、河豚毒素(Tetrodotoxin，簡稱TTX)是一種劇毒的海洋生物毒素，其微量制劑具有很好的局部麻醉和鎮(zhèn)痛效果。河豚魚中廣泛分布河豚毒素，是一種珍稀的海洋藥物資源。我國東南沿海河豚魚資源豐富，毒性分布相當復雜。目前，除個別品種的低毒部位用于加工出口外，高毒品種和生產(chǎn)過程中剔除的高毒部位大量廢棄，既造成了資源浪費，也帶來了一定的環(huán)境污染。
　　 本文調(diào)查了東南沿海常見河豚魚的毒性分布情況，對TTX的超聲輔助提取和柱層析純化工藝進

2、行了系統(tǒng)的研究，旨在尋找一種高效、低廉、可操作性強的生產(chǎn)方法，研究結(jié)果如下：
　　 1、通過形態(tài)學特征對福建、廣東沿海采集的132條河豚魚進行品種鑒定，并采用小鼠生物試驗法和酶聯(lián)免疫檢測法研究其毒性分布。結(jié)果表明：采集的河豚魚共12種，主要為腹刺鲀屬和東方鲀屬，其中腹刺鲀屬是主導魚類，占總樣本量的75.8[％]；TTX在河豚魚種和魚體不同部位間的分布差異極顯著，主要集中在卵巢和肝臟，皮和肌肉多數(shù)為無毒或弱毒，而月腹刺鲀?nèi)~有毒，

3、卵巢毒力高達251.4 MU，是最佳的提毒原料。
　　 2、采用L9(34)正交試驗和響應面分析法對傳統(tǒng)水浴法和超聲輔助法提取月腹刺鲀卵巢TTX的工藝條件進行了優(yōu)化和比較，結(jié)果表明：以0.1[％]的乙酸為提取溶劑，液料比4:1，80 ℃水浴下提取2次(10 min/次)，月腹刺鲀卵巢TTX的得率為50.23 μg/g；液料比3:1，超聲頻率40 kHz，功率40 W，40 ℃水浴下提取1次(22 min/次)，月腹刺鲀卵巢TTX

4、的得率為63.57 μg/g，比傳統(tǒng)水浴提取法提高26.6[％]。
　　 3、以超聲輔助法提取的TTX粗提液為原料，對D152離子交換樹脂、顆?；钚蕴亢虰io-Gel P2凝膠柱層析依次純化TTX工藝進行了研究。結(jié)果表明：TTX粗提液在pH 5.0、上樣流速6 mL/min的D152樹脂吸附條件下，以洗脫流速1.8 BV/h、洗脫體積7 BV的2[％]乙酸洗脫效果最佳，回收率高達98.4[％]，純度為0.33[％]；樹脂純化液在

5、pH 7.0、上樣量50 mL、上樣流速2 mL/min的活性炭吸附條件下以洗脫流速6.0 BV/h、洗脫體積8 BV的1[％]～5[％]的乙酸進行梯度洗脫效果最佳，回收率為92.5[％]，純度為4.93[％]；活性炭純化液在pH 7.0、上樣量4.0 mL、上樣濃度450 μg/mL的凝膠層析條件下，以洗脫流速6.0 BV/h、洗脫體積1 BV的純水和2 BV的1[％]乙酸分步洗脫效果較佳，回收率為89.4[％]，純度為46.6[％]