納米磁性免疫層析技術與致病性病原微生物檢測研究.pdf

1、磁性免疫層析技術是基于免疫層析技術的基礎之上，將磁性納米材料的磁信號與免疫層析技術相結合，使免疫層析技術向定量化、高靈敏度、多元化檢測、層析系統(tǒng)集成化等方向發(fā)展。納米磁珠是含有鐵元素的超順磁納米顆粒，外面包覆著聚乙烯類高分子物質，并可帶羧基或氨基，用于和蛋白質分子交聯(lián)。由于磁珠呈球狀，表面積大，在三維空間的各個方向均可結合標記物；結合納米磁珠的磁性，運用磁性富集的原理，能定量檢測到微量（pg級）的標記物，為納米免疫磁珠檢測試劑的研制提供

2、了可能；磁信號還可通過磁信號閱讀儀判讀，從而使檢測結果定量化。因此成為近年來即時檢驗（point of care testing,POCT）技術發(fā)展的重要內容之一。
　　本課題通過EDC/NHS偶聯(lián)抗體法制備免疫磁珠，并對每組實驗中層析條件及材料進行了優(yōu)化和處理，分別構建了單價免疫層析平臺、多價免疫層析平臺，并在這兩個平臺的基礎上研制出了甲型H1N1流感病毒快速層析定量檢測試紙條和輸血相關病原微生物（乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅

3、毒螺旋體、艾滋病病毒）的多聯(lián)試紙條，實驗過程中分別考察了各自試紙條的靈敏度、特異性、穩(wěn)定性等問題，并研究了與層析相關的材料試劑如磁珠粒徑、加樣量、抗體濃度及用量，以及表面活性劑、大分子物質、穩(wěn)定劑和鹽離子等對層析條件的影響。
　　實驗證明所構建的單價和多價免疫層析平臺具有可行性，所建立的人絨毛膜促性腺激素（Human Chorionic Gonadotrophin,HCG）快速檢測試紙條和乙肝表面抗原（Hepatitis B vi

4、rus Surface Antigen,HBsAg）快速檢測試紙條都具有高靈敏度，能夠達到并超過同類的膠體金和ELISA產品的標準，特別是在靈敏度方面HCG可檢測到1miu/ml的HCG抗原，符合率達到99％，且時間控制在5min以內；對HBsAg的檢測也具有很高的靈敏度（0.1ng/ml），達到了同類產品膠體金和ELISA的分析標準，時間也控制在5min內；通過對甲型H1N1流感病毒抗原檢測試紙條的研究顯示，肉眼可見的檢測下限為10.

5、0ng/ml，通過MAR磁信號檢測儀檢測最低下限為100pg/ml，高于同類產品膠體金法和ELISA法，通過臨床樣本的檢測，磁免疫層析試紙條對甲型H1N1的敏感度相對膠體金為85％（38％），與季節(jié)性H3N2的交叉反應為10％（60％），與B型流感的交叉反應為0％（0％），且兩種方法對PCR陰性標本均無假陽性產生；對輸血相關病原微生物的研究表明，將幾種病原微生物的檢測整合在一個試紙條上的方式具有一定的困難，靈敏度不高，反應速度變慢，還需

6、進一步研究影響其靈敏度的因素?；谝陨辖Y果，可以認為HBsAg檢測試紙條和H1N1檢測試紙條已經達到了臨床應用的需求，輸血四項檢測試紙條對未來輸血聯(lián)合檢測具有重大意義，可以進一步研究。
　　本課題將超順磁性納米顆粒代替?zhèn)鹘y(tǒng)的以膠體金或者乳膠微球為標記的光學免疫層析檢測技術，建立了具有操作簡便、快速、靈敏度高、特異性強、結果客觀便于實時記錄保存，適用于平時、戰(zhàn)時現(xiàn)場檢測，更重要的是，通過對層析試紙的多種檢測條帶的設計，可實現(xiàn)多價病原