SUMO-1在牛精子中定位與表達及潛在靶蛋白的初步篩選.pdf

1、公牛繁殖能力及公牛選育對畜牧行業(yè)養(yǎng)牛生產(chǎn)非常重要。因此，對公牛精子發(fā)生、精子成熟及精液品質(zhì)調(diào)控機制的研究可以為提高公牛繁殖性能提供重要的理論參考。成熟精子中DNA高度濃縮，導致轉(zhuǎn)錄和翻譯過程沉默。因此翻譯后修飾方式對精子功能包括卵母細胞受精過程中精子獲能和頂體反應具有重要調(diào)節(jié)作用。SUMO化修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式之一，參與調(diào)節(jié)多種生物學功能。為了初步闡明SUMO化修飾在水牛和奶牛精子成熟過程、獲能及頂體反應過程中的可能作用。本

2、課題對水牛和奶牛精子中SUMO-1的亞細胞定位和表達情況進行了研究;并通過免疫蛋白印跡、免疫共沉淀化和質(zhì)譜法對SUMO-1在精子中潛在的靶蛋白進行了初步鑒定;通過生物信息學方法初步分析了其功能和參與調(diào)控途徑;通過SUMO化修飾預測靶蛋白軟件初步預測了所篩選到蛋白的潛在SUMO-1修飾位點。研究結果如下。
　　(1).免疫熒光方法檢測了SUMO-1在水牛和奶牛精子中的定位和表達。證實SUMO-1的免疫信號主要集中在頂體中。另外，免疫

3、印記結果發(fā)現(xiàn)鈣離子載體A23187誘導精子發(fā)生頂體反應后，SUMO-1表達模式發(fā)生變化。精子獲能后，130，37和27 kDa附近SUMO-1結合蛋白條帶強度下降，在30，85和50 kDa附近條帶增強。此外，精子獲能后誘導發(fā)生頂體反應后，37 kDa條帶下降，25 kDa以下條帶消失。這些結果暗示精子獲能和項體反應過程中精子中SUMO-1介導的SUMO化修飾方式可能發(fā)生了變化，這些改變可能與精子獲能和項體反應的調(diào)控有關。
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4、2).質(zhì)譜方法檢測了水牛精子中與SUMO-1共價結合蛋白成份。初步鑒定出包括維持精子形態(tài)和運動能力的60個蛋白，如松弛素受體和細胞骨架蛋白包括微管、微絲和動力蛋白。其中46個蛋白被SUMO化靶蛋白預測軟件預測為SUMO化修飾的靶蛋白。
　　總之，本研究結果發(fā)現(xiàn)SUMO-1在水牛和奶牛精子中存在，且在精子獲能和頂體反應過程中表達模式改變，為研究SUMO-1在牛精子成熟、獲能和頂體反應過程中的SUMO化修飾及其調(diào)控作用提供了重要理論參