HbMYB1蛋白在畢氏酵母中的表達(dá)及靶序列的研究.pdf

1、橡膠樹死皮病(tappingpaneldryness，TPD)在世界各橡膠種植園普遍發(fā)生，對橡膠種植業(yè)危害極大。據(jù)估計(jì)，全世界每年因橡膠樹死皮病損失的干膠產(chǎn)量為50萬噸，價(jià)值相當(dāng)于4億美元。因此橡膠樹死皮受到了各植膠國的高度重視。橡膠樹死皮病被認(rèn)為是一種復(fù)雜的生理綜合癥。人們?yōu)閷ふ宜榔ぐl(fā)病原因和探索死皮機(jī)理做了不懈的努力，其研究涉及病理學(xué)、解剖學(xué)、生理學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)等多個(gè)學(xué)科，并從不同學(xué)科的角度提出了各種假說。但對于死皮病發(fā)生的真

2、正原因。至今還沒有令人滿意的解釋。 從分子生物學(xué)水平上進(jìn)行研究，可能更容易接近死皮病的本質(zhì)。已經(jīng)克隆出的基因HbMybl已經(jīng)被證實(shí)與死皮抗性有關(guān)。MYB蛋白是已經(jīng)克隆出來的HbMybl基因所編碼的一種蛋白，可能是一種轉(zhuǎn)錄激活因子，對其作用的目的基因展開研究能為下一步準(zhǔn)確研究死皮病致病機(jī)理打下基礎(chǔ)。具有重要的理論意義和實(shí)用價(jià)值。 本研究通過將Myb基因片段插入pPICZαB質(zhì)粒中，構(gòu)建成pPICZαB-HbMylb表達(dá)載體

3、；該載體經(jīng)SacI線形化后以化學(xué)方法導(dǎo)入GS115酵母菌株中，經(jīng)YPD平板Zeocin抗性篩選獲得HbMyb表達(dá)陽性菌株；將其進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)培養(yǎng)，對搖瓶發(fā)酵的培養(yǎng)上清進(jìn)行SDS-PAGE分析，結(jié)果表明已分泌表達(dá)了MYB蛋白。 本研究還利用免疫沉淀獲取的一段.相關(guān)軟件分析表明為外顯子序列(約200bp)的片段分別設(shè)計(jì)3'RACE，5'RACE引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增靶基因cDNA序列的3'，5'端。已經(jīng)獲取得到完整的3'序列約423bp，