Exendin-4對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)的小鼠胰島β細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討PI3K/Akt/Bcl-2信號(hào)通路在游離脂肪酸誘導(dǎo)的小鼠胰島β細(xì)胞株MIN6細(xì)胞凋亡中的作用；在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究GLP-1受體激動(dòng)劑Exendin-4對(duì)FFA誘導(dǎo)的MIN6細(xì)胞凋亡的作用及其可能的機(jī)制。 方法：選用小鼠胰島β細(xì)胞株MIN6細(xì)胞為研究對(duì)象，用不同濃度(0.2-1.6mmol/L)FFA誘導(dǎo)刺激，模擬體外β細(xì)胞脂毒性損傷后的細(xì)胞凋亡模型，通過(guò)MTT觀察FFA作用后細(xì)胞的存活率；Hoechst-PI染色

2、熒光顯微鏡觀測(cè)細(xì)胞凋亡形態(tài)，Annexin-Ⅴ-PI染色流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡率，Western blot技術(shù)檢測(cè)胞漿Akt、P-Akt、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)水平的變化。在此基礎(chǔ)上，用不同濃度(12.5-200nmol/L)的Exendin-4預(yù)處理細(xì)胞，觀察Exendin-4對(duì)FFA誘導(dǎo)的MIN6細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用，并選定一個(gè)合適的濃度進(jìn)一步研究Exendin-4是否通過(guò)PI3K/Akt/Bcl-2信號(hào)通路影響FFA誘導(dǎo)MIN

3、6細(xì)胞發(fā)生凋亡性損傷。 結(jié)果：MTT顯示FFA(0.4-1.6mmol/L)作用不同時(shí)間后可明顯抑制MIN6細(xì)胞的生長(zhǎng)，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系；Hoechst-PI染色熒光顯微鏡及Annexin-Ⅴ-PI雙染流式細(xì)胞檢測(cè)證實(shí)不同濃度的FFA處理48小時(shí)后，隨著FFA濃度的增高，其誘導(dǎo)MIN6細(xì)胞的凋亡作用就更強(qiáng)。不同濃度的FFA處理48小時(shí)后，隨著FFA濃度的增加，細(xì)胞內(nèi)P-Akt、Bcl-2蛋白水平降低，而Akt、Bax蛋白水平

4、變化不明顯。不同濃度的Exendin-4預(yù)處理24小時(shí)，可以抑制FFA誘導(dǎo)的β細(xì)胞凋亡，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，并且Exendin-4能抑制FFA誘導(dǎo)的胞內(nèi)P-Akt、Bcl-2蛋白水平的降低。 結(jié)論：(1) FFA可誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞發(fā)生凋亡性損傷，在此過(guò)程中伴隨細(xì)胞內(nèi)P-Akt、Bcl-2蛋白水平的降低；(2)PI3K/Akt/Bcl-2信號(hào)通路可能是FFA誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞發(fā)生凋亡的重要通路之一；(3)GLP-1受體激動(dòng)劑Exen