長鏈游離脂肪酸對大鼠胰島的脂毒性和脂凋亡影響及瘦素的保護作用.pdf

1、該研究的目的是:1.研究長鏈游離脂肪酸(LC-FFA)對體外培養(yǎng)大鼠胰島的影響;2.研究β細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯(TG)與胰島脂毒性、脂凋亡指標(biāo)的關(guān)系;3.探討瘦素對胰島脂毒性、脂凋亡的干預(yù)作用.方法:1.取正常成年Sprague Dawley (SD)雄性大鼠的胰腺,經(jīng)過V型膠原酶消化,將胰島從胰腺中分離、純化出來,顯微鏡下收集.在含15﹪胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基中進行原代培養(yǎng),葡萄糖濃度大約為8.0-9.0mmol/L,經(jīng)過

2、胰島功能測試后,證明該分離胰島具有活性,可進行實驗.2.調(diào)整胰島懸液濃度,均勻接種在24孔培養(yǎng)板,每孔大約50個胰島,在37℃5﹪CO<,2>孵箱中培養(yǎng)6日.在種板當(dāng)時各孔加入相應(yīng)的各組培養(yǎng)液.按每3孔為1組.3.在培養(yǎng)的第2、4日取培養(yǎng)液上清,保存于-20℃,留待檢測Ins與NO,同時更換相應(yīng)各組培養(yǎng)液;在培養(yǎng)的第4、6日,將胰島用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗3次,-80℃凍存,留待提取DNA和測定胞內(nèi)TG.結(jié)論:前提:該實驗在這種具體