游離脂肪酸對小鼠胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞凋亡及功能的影響.pdf

1、目的:研究不同濃度的游離脂肪酸(free fatty acids,FFA)的不同作用時間對小鼠胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞凋亡及功能產(chǎn)生的影響。以期進(jìn)一步分析FFA水平異常介導(dǎo)β細(xì)胞損害的機制,為糖脂代謝紊亂患者的治療提供參考。
　　方法:以小鼠的胰島β細(xì)胞株NIT-1為研究對象,在PRMI1640培養(yǎng)液中加入含10％小牛血清、100 U/ml青霉素、100 mg/L鏈霉素,置于5%CO2、37℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。在倒置相光

2、學(xué)顯微鏡下觀察培養(yǎng)瓶中的胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞的生長情況;繪制生長曲線,取對數(shù)期生長的細(xì)胞分為實驗組、FFA0.25mmol/l組、FFA0.5mmol/l組、FFA1.0mmol/l組。采用MTT比色法檢測不同濃度FFA及不同作用時間(24h,48h,72h)干預(yù)后各組細(xì)胞OD值,計算胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞的增殖抑制率;采用免疫熒光染色法檢測凋亡細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用熒光顯微鏡(Olympus,日本)觀察細(xì)胞凋亡情況;采用放射免疫分

3、析法檢測各組胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞培養(yǎng)基中的胰島素水平,了解細(xì)胞功能。所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。各指標(biāo)以x±s表示,實驗組與對照組組間均數(shù)比較,所得結(jié)果用方差分析、兩樣本t檢驗及配對樣本t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:①采用MTT法測定各組細(xì)胞OD值,與對照組比較,FFA0.25 mmol/L誘導(dǎo)24 h后的細(xì)胞增殖活性無明顯降低(P>0.05),0.5 mmol/L和1

4、mmol/L FFA誘導(dǎo)24 h后的細(xì)胞增殖活性明顯降低(P<0.05),不同濃度FFA誘導(dǎo)48,72h后的細(xì)胞增殖活性與對照組比較均明顯降低,細(xì)胞增殖抑制率上升。②FFA對NIT-1細(xì)胞胰島素分泌功能的影響:對照組與FFA實驗組分別培養(yǎng)24h、48h、72h收集各組細(xì)胞上清液,用放射免疫分析方法檢測各組胰島素值比較各組隨著濃度及作用時間的增加,胰島素水平隨之減少,甚至完全被抑制。③免疫熒光染色檢測凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)分析:熒光顯微鏡下可見

5、空白對照組細(xì)胞核形態(tài)為圓形或橢圓形,邊界清楚,FFA組出現(xiàn)凋亡細(xì)胞核變形,表現(xiàn)為核碎裂、固縮、核小體形成。
　　結(jié)論:①FFA干預(yù)后的βNIT-1細(xì)胞增殖抑制率隨FFA作用時間延長、濃度增加而進(jìn)行性增加。FFA水平異常不利于胰島βNIT-1細(xì)胞生存。②FFA干預(yù)后的βNIT-1細(xì)胞的胰島素分泌水平隨FFA作用時間延長、濃度增加而進(jìn)行性減少,FFA對于NIT-1細(xì)胞的胰島素分泌功能有明顯的時間和濃度依賴性?？烧T導(dǎo)βNIT-1細(xì)胞凋亡

6、,降低其分泌功能。③FFA干預(yù)后的βNIT-1細(xì)胞隨著作用濃度和時間的增加凋亡細(xì)胞比例增加。因此,脂代謝異?？擅黠@損害胰島β細(xì)胞的功能,及早干預(yù)血脂水平,消除脂毒性可作為糖尿病防治中的一項重要指標(biāo)。
　　意義:近年來2型糖尿病的脂毒性作用已日益受到重視。通過本實驗我們可以看出,早期降脂治療,對改善胰島β細(xì)胞功能有著非常積極的作用和意義,及早干預(yù)血脂異常促進(jìn)的胰島β細(xì)胞凋亡,盡可能的保存細(xì)胞的胰島素分泌功能。糖尿病防治的長遠(yuǎn)目標(biāo)應(yīng)在