蝴蝶蘭花色成因分析及適宜轉(zhuǎn)藍(lán)色基因的品種選擇.pdf

1、本研究根據(jù)課題組長期從事于單子葉植物藍(lán)色花的研究結(jié)果，以18種蝴蝶蘭品種作為材料，通過表觀鑒定和解剖觀察對花色進行鑒定分類，用高效液相色譜、液質(zhì)聯(lián)用對蝴蝶蘭色素成分進行定性與定量，于初選品種進行類黃酮代謝相關(guān)基因分析、瞬時表達(dá)。本研究對蝴蝶蘭類黃酮代謝途徑機理的揭示，對系統(tǒng)地調(diào)控蝴蝶蘭花色具有一定借鑒意義。取得的結(jié)果如下:
　　1.用高效液相色譜法（High performance liquid chromatography, H

2、PLC）建立類黃酮化合物的分析方法，結(jié)果表明，條件為流動相A為0.1％甲酸水，B為80％乙腈，洗脫程序0min，12％B;15min，25％B;32min，38％B;40min,38％B;45min，12％B;50min，12％B，可以達(dá)到良好的分離效果。
　　2.代謝分析表明，不同品種的蝴蝶蘭和葡萄風(fēng)信子色素模式完全不同。蝴蝶蘭中520nm下分離出29種組分，主要花青苷類型為Cy和Pg型色素衍生物，黃酮和類黃酮主要為芹菜素衍生物

3、;葡萄風(fēng)信子同波長條件下分離出14種組分，主要花青苷類型為Dp及其甲基化色素Pt、Mv衍生物，黃酮和類黃酮主要物質(zhì)為山奈酚衍生物。
　　3.對不同蝴蝶蘭品種的類黃酮通路關(guān)鍵酶基因CHS、F3H、F3y'H進行表達(dá)分析，結(jié)果表明不同品種的基因各時期表達(dá)模式均有差異，但種內(nèi)的三個基因表達(dá)趨勢一致。在紫紅色的品種中，基因的表達(dá)水平高于白色品種。
　　4.使用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將PhCHS、PhDFR、PhF3'H等基因?qū)?yīng)RNA干擾載體

4、和IhDFR、IhF3'5'H、MaDFR、MaF3'5'H、ThDFR、CcF3'5'H等基因?qū)?yīng)過量表達(dá)載體對蝴蝶蘭進行瞬時轉(zhuǎn)化。三種基因的RNA干擾均存在花瓣顏色變淺的現(xiàn)象，pKANNIBAL-PhDFR和pKANNIBAL-PhCHS干擾效果相似，前者略明顯，使花瓣花青苷總量降低了約70％; PhF3'H的RNA干擾導(dǎo)致花瓣花青苷總量降低了60％，其反義片段只減少47％。過量表達(dá)未得到理想結(jié)果。菌株GV3101的效果優(yōu)于EHA1