我國(guó)發(fā)現(xiàn)攜帶插入序列IS1203變種的志賀毒素2基因的大腸桿菌O157：H7.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文我國(guó)發(fā)現(xiàn)攜帶插入序列IS1203變種的志賀毒素2基因的大腸桿菌O157：H7姓名：羅霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：李芳20050601Oi57：H7均分離自江蘇羊糞標(biāo)本，編號(hào)為9的l株大腸桿菌0157：H7分離白安徽豬糞標(biāo)本。經(jīng)過核苷酸序列測(cè)定和序列比較分析發(fā)現(xiàn)，這種新型的志賀毒素2基因均有一長(zhǎng)度為1313bp的插入片段，導(dǎo)致長(zhǎng)度為1241bp的野生型志賀毒素2基因增長(zhǎng)為2554bp。該插入片段包括一

2、長(zhǎng)度為1310bp的插入序列(insertionsequence，IS)和因插入產(chǎn)生的長(zhǎng)度為3bp的同向重復(fù)序列(directrepeat，DR)。除這段3bp的同向重復(fù)序列外，這三段長(zhǎng)1310bp插入序列完全一致，與1999年日本報(bào)道的插入在志賀毒素2基因中的插入序列1203變種(insertionsequence1203variant，ISl203v)(stx2：：ISl203v)有100％的序列同源性。這是首次在我國(guó)發(fā)現(xiàn)攜帶stx

3、2：：ISl203v的大腸桿菌0157：H7菌株。此外，ISl203v在這3株菌的志賀毒素2基因中的插入位置各不相同，而且其中大腸桿菌02F044和9的ISl203v的開放性讀碼框與各自Stx2A、B亞單位的開放性讀碼框方向相反，另一株大腸桿菌9981l3的ISl203v的開放性讀碼框與Stx2A、B皿單位的開放性讀碼框方向相同。提示ISl203v的插入可能引起志賀毒素2的在產(chǎn)量或活性功能的改變。此外，對(duì)這3株攜帶stx2：：ISl20

4、3v的大腸桿菌0157：H7進(jìn)行常規(guī)方法制備志賀毒素2并對(duì)其制備的產(chǎn)物進(jìn)行HeLa、Vero細(xì)胞毒試驗(yàn)分析，將測(cè)定HeLa、Vero細(xì)胞乳酸脫氫酶釋放量做為志賀毒素2細(xì)胞毒性的一個(gè)指示。我們發(fā)現(xiàn)這用這3株菌的志賀毒素2制備產(chǎn)物對(duì)HeLa和Vero細(xì)胞均能產(chǎn)生致細(xì)胞病變作用的形態(tài)學(xué)改變。志賀毒素2的制備產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞乳酸脫氫酶釋放量的結(jié)果顯示，在18小時(shí)內(nèi)，大腸桿菌02F044、998113和9志賀毒素2的制備產(chǎn)物分別對(duì)HeLa細(xì)胞產(chǎn)生了25

5、16％、2608％、2607％的乳酸脫氫酶釋放量，比僅攜帶志賀毒素2的陽性對(duì)照菌株5162％的乳酸脫氫酶釋放量低；對(duì)Vero細(xì)胞分別為3115％、3031％、3132％，也低于陽性對(duì)照菌株4053％的乳酸脫氫酶釋放量。提示ISl203v的插入對(duì)志賀毒素2的活性有所影響。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，3株菌志賀毒素2的制各產(chǎn)物對(duì)HeLa細(xì)胞乳酸脫氨酶釋放的值均低于僅攜志賀毒素2的大腸桿菌0157：H7陽性對(duì)照菌株(P005)；但對(duì)Vero細(xì)胞而言，3