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1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文我國(guó)發(fā)現(xiàn)攜帶插入序列IS1203變種的志賀毒素2基因的大腸桿菌O157:H7姓名:羅霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):免疫學(xué)指導(dǎo)教師:李芳20050601Oi57:H7均分離自江蘇羊糞標(biāo)本,編號(hào)為9的l株大腸桿菌0157:H7分離白安徽豬糞標(biāo)本。經(jīng)過核苷酸序列測(cè)定和序列比較分析發(fā)現(xiàn),這種新型的志賀毒素2基因均有一長(zhǎng)度為1313bp的插入片段,導(dǎo)致長(zhǎng)度為1241bp的野生型志賀毒素2基因增長(zhǎng)為2554bp。該插入片段包括一
2、長(zhǎng)度為1310bp的插入序列(insertionsequence,IS)和因插入產(chǎn)生的長(zhǎng)度為3bp的同向重復(fù)序列(directrepeat,DR)。除這段3bp的同向重復(fù)序列外,這三段長(zhǎng)1310bp插入序列完全一致,與1999年日本報(bào)道的插入在志賀毒素2基因中的插入序列1203變種(insertionsequence1203variant,ISl203v)(stx2::ISl203v)有100%的序列同源性。這是首次在我國(guó)發(fā)現(xiàn)攜帶stx
3、2::ISl203v的大腸桿菌0157:H7菌株。此外,ISl203v在這3株菌的志賀毒素2基因中的插入位置各不相同,而且其中大腸桿菌02F044和9的ISl203v的開放性讀碼框與各自Stx2A、B亞單位的開放性讀碼框方向相反,另一株大腸桿菌9981l3的ISl203v的開放性讀碼框與Stx2A、B皿單位的開放性讀碼框方向相同。提示ISl203v的插入可能引起志賀毒素2的在產(chǎn)量或活性功能的改變。此外,對(duì)這3株攜帶stx2::ISl20
4、3v的大腸桿菌0157:H7進(jìn)行常規(guī)方法制備志賀毒素2并對(duì)其制備的產(chǎn)物進(jìn)行HeLa、Vero細(xì)胞毒試驗(yàn)分析,將測(cè)定HeLa、Vero細(xì)胞乳酸脫氫酶釋放量做為志賀毒素2細(xì)胞毒性的一個(gè)指示。我們發(fā)現(xiàn)這用這3株菌的志賀毒素2制備產(chǎn)物對(duì)HeLa和Vero細(xì)胞均能產(chǎn)生致細(xì)胞病變作用的形態(tài)學(xué)改變。志賀毒素2的制備產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞乳酸脫氫酶釋放量的結(jié)果顯示,在18小時(shí)內(nèi),大腸桿菌02F044、998113和9志賀毒素2的制備產(chǎn)物分別對(duì)HeLa細(xì)胞產(chǎn)生了25
5、16%、2608%、2607%的乳酸脫氫酶釋放量,比僅攜帶志賀毒素2的陽性對(duì)照菌株5162%的乳酸脫氫酶釋放量低;對(duì)Vero細(xì)胞分別為3115%、3031%、3132%,也低于陽性對(duì)照菌株4053%的乳酸脫氫酶釋放量。提示ISl203v的插入對(duì)志賀毒素2的活性有所影響。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,3株菌志賀毒素2的制各產(chǎn)物對(duì)HeLa細(xì)胞乳酸脫氨酶釋放的值均低于僅攜志賀毒素2的大腸桿菌0157:H7陽性對(duì)照菌株(P005);但對(duì)Vero細(xì)胞而言,3
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