基于ATP生物發(fā)光法與免疫磁分離技術(shù)檢測(cè)大腸桿菌O157：H7的研究.pdf

1、大腸桿菌O157：H7作為食源性致病菌，在我國(guó)存在流行暴發(fā)的可能性和感染的嚴(yán)重性。而傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)法存在耗時(shí)、費(fèi)力、操作繁瑣等缺點(diǎn)，因此急需研究一種用于其快速檢測(cè)的方法。本課題調(diào)查了目前國(guó)際上生物傳感器等領(lǐng)域的諸多新型檢測(cè)技術(shù)，最終將ATP生物發(fā)光法與免疫磁分離技術(shù)作為主要研究手段與內(nèi)容，并對(duì)其進(jìn)行了較為深入的探討和研究。
　　 本課題的主要研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下：
　　 1．比較了pH=7.4條件下，四種緩沖液Tris

2、—HCl、Na2HPO4—C6H8O7、KH2PO4—NaOH、PBS對(duì)發(fā)光反應(yīng)的影響，得出Tris—HCl緩沖液對(duì)菌液的稀釋效果最好。
　　 2．比較了質(zhì)量濃度均為10g/L的五種化學(xué)物質(zhì)NaOH、NaCl、NaH2PO4、KCl、MgCl2對(duì)發(fā)光反應(yīng)的影響，得出MgCl2對(duì)發(fā)光有明顯的增強(qiáng)作用，其它四種對(duì)發(fā)光均有一定的抑制作用，抑制作用強(qiáng)弱為：NaOH＞NaCl＞NaH2PO4＞KCl。
　　 3．比較了不同的菌體—

3、免疫磁珠濃度配比1：6.34、1：12.69、1：25.38、1：30.07下的免疫磁分離技術(shù)的捕獲率，結(jié)果表明當(dāng)菌體—IMB濃度配比為1：30時(shí)，捕獲率近100％。
　　 4．在總體積、免疫磁珠加入量不變的情況下，比較了E．coli O157：H7、Bacillus subtilis兩種細(xì)菌不同的體積比(0.3mL：0.1mL、0.2mL：0.2mL、0.1mL：0.3mL)下的捕獲率，結(jié)果分別是98.54％、82.18％、8