引導(dǎo)骨再生殼聚糖-膠原可吸收膜的研制及其物理性能、生物相容性的研究.pdf

1、目的：引導(dǎo)骨再生技術(shù)(GuidedBoneRegeneration，GBR)的出現(xiàn)，為局部牙槽骨缺損的患者行種植義齒修復(fù)提供了可能。目前，GBR已成為一種常規(guī)的牙種植輔助技術(shù)，可改善缺牙區(qū)骨組織的質(zhì)量和數(shù)量，以滿足種植體的植入條件。而屏障膜在GBR技術(shù)中起著重要作用。本研究將殼聚糖和膠原以不同比例混合，通過機(jī)械性能測試、體外細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和動物體內(nèi)埋植實(shí)驗(yàn)對其進(jìn)行物理性能、生物相容性及降解性研究，以期將自主研發(fā)的殼聚糖.膠原可吸收膜應(yīng)用于

2、牙種植引導(dǎo)骨再生技術(shù)。
　　 方法：(1)將2％的低分子量殼聚糖(Mw50,000～190,000)冰乙酸溶液與0.3％的膠原水溶液以體積比2:1，1:1、1:2(定義為A，B，C組)混合，加入1％的NaOH溶液調(diào)節(jié)混合液至pH呈中性，混合液經(jīng)4℃靜置過夜除氣泡，-20℃冷凍24h和-80℃預(yù)凍12h后，采用凍干法制備A、B、C三組殼聚糖-膠原膜。通過拉伸實(shí)驗(yàn)和壓汞實(shí)驗(yàn)研究膜的物理性能。用掃描電鏡觀察比較凍干膜與Bio-Gide

3、膜表面形態(tài)的差異。
　　 (2)將2％的低分子量殼聚糖冰乙酸溶液(CHS-L)、1％的中分子量殼聚糖(MW190,000～310,000)冰乙酸溶液(CHS-M)及0.1％的膠原(MW300,000)冰乙酸溶液(COL)分別透析至溶液pH呈中性。分別將CHS-L和CHS-M與COL以2:1和4:1的體積比混合，得到四種混合液?；旌弦航?jīng)4℃靜置過夜除氣泡、-20℃冷凍48h和-80℃預(yù)凍24h后，采用凍干法制備殼聚糖-膠原膜。將膜

4、裁剪至所需大小后，獨(dú)立包裝EO滅菌。
　　 (3)將滅菌膜片浸入配好的細(xì)胞培養(yǎng)液中，膜表面積與培養(yǎng)液比例為6cm2/ml，用膜浸提液和常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)MC3T3-El細(xì)胞，采用MTT實(shí)驗(yàn)評價膜對細(xì)胞增殖活性的影響。
　　 (4)將滅菌膜片植入8只新西蘭兔的背部皮下組織內(nèi)，手術(shù)后1周、2周、4周、8周各隨機(jī)處死2只動物，取出剩余膜材料。通過計算膜植入前后的質(zhì)量差測定膜在動物體內(nèi)的降解率。
　　 結(jié)果：(1)低分子

5、量殼聚糖冰乙酸溶液與膠原水溶液混合制備的A(2:1)、B(1:1)、C(1:2)三組凍干膜，以2:1和1:1比例制備的膜成膜效果較好，以1:2比例制備的膜成膜效果較差(不進(jìn)行物理性能評價)。拉伸實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以2:1比例制備的膜機(jī)械性能優(yōu)于1:1比例制備的膜；壓汞實(shí)驗(yàn)顯示，以2:1和1:1比例制備的膜存在廣泛的孔隙，孔隙率分別為89.41％和83.92％；通過掃描電鏡觀察，2:1和1:1比例制備的兩組凍干膜孔隙均較Bio-Gide膜大。

6、
　　 (2)2％的低分子量殼聚糖冰乙酸溶液、1％的中分子量殼聚糖冰乙酸溶液和0.1％的膠原冰乙酸溶液分別透析至溶液呈中性后，未見絮狀物質(zhì)析出。殼聚糖溶液可與膠原溶液均勻混合，混合液經(jīng)真空凍干可制成膜。兩種中分子量殼聚糖凍干膜的厚度和密度，均大于低分子量殼聚糖制備的凍干膜。
　　 (3)中分子量殼聚糖制備的兩種凍干膜，對小鼠MC3T3-El細(xì)胞增殖無抑制。殼聚糖與膠原體積比為4:1時，其浸提液對MC3T3-El細(xì)胞的增殖

7、表現(xiàn)出顯著的促進(jìn)作用，特別是從第4天開始，OD490值明顯高于對照組(P<0.01)；殼聚糖與膠原體積比為2:1時，其浸提液對MC3T3-El細(xì)胞增殖無顯著影響，OD490值僅稍高于對照組(P>0.05)。
　　 (4)皮下埋植實(shí)驗(yàn)顯示，兩種中分子量殼聚糖-膠原凍干膜植入動物皮下組織后未見明顯的炎癥反應(yīng)。兩種殼聚糖.膠原凍干膜在動物體內(nèi)可降解吸收。8周時，殼聚糖-膠原凍干膜(2:1和4:1)的降解率分別為43.83％和26.45