逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的HO-1基因在AMN107誘導(dǎo)K562-A02凋亡中的作用.pdf

1、貴陽醫(yī)學(xué)院2012屆碩士研究生論文《中國圖書資料分類法》單位代碼：10660分類號：R73362學(xué)號：10660S090183貴陽醫(yī)學(xué)院貴陽醫(yī)學(xué)院2012屆碩士學(xué)位論文屆碩士學(xué)位論文逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的HO1基因在基因在AMN107誘導(dǎo)誘導(dǎo)K562A02凋亡中的作用凋亡中的作用研究生：生：陳珵導(dǎo)師：師：王季石教授年級：級：2009級專業(yè)：業(yè)：血液內(nèi)科學(xué)2012年5月23日3逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的HO1基因在基因在A

2、MN107誘導(dǎo)誘導(dǎo)K562A02凋亡中凋亡中的作用的作用專業(yè):內(nèi)科學(xué)（血液病學(xué)）研究生：陳珵導(dǎo)師：王季石教授摘要摘要目的研究逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的血紅素加氧酶1（HO1）基因在尼羅替尼（Nilotinib，AMN107，）誘導(dǎo)慢性髓系白血病(CML)耐藥細(xì)胞(K562A02)凋亡中的作用并探討HO1基因與CML的關(guān)系。方法從人肝克隆HO1基因，構(gòu)建含HO1基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pQCXIPEGFPC1感染293T細(xì)胞，制備高病毒滴度的逆轉(zhuǎn)錄病毒

3、載體pQCXIPEGFPHO1。G418篩選法建立轉(zhuǎn)染HO1基因的K562A02細(xì)胞。RTPCR鑒定K562A02細(xì)胞中HO1基因的表達(dá)。采用RTPCR法和WesternBlot法檢測AMN107作用24h后K562A02中HO1基因的表達(dá)；采用MTT法觀察細(xì)胞增殖變化；通過實(shí)時熒光定量PCR(RQPCR)法檢測BCRABL融合基因的表達(dá)；通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。結(jié)果成功構(gòu)建重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體并建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HO1的K562

4、A02細(xì)胞系；RTPCR結(jié)果顯示K562A02細(xì)胞中HO1呈顯著表達(dá)。RTPCR法和Westernblot法均檢測到AMN107作用后轉(zhuǎn)基因細(xì)胞組HO1的表達(dá)最高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；MTT法示AMN107處理組細(xì)胞抑制率升高，而轉(zhuǎn)基因細(xì)胞組抑制率升高不明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；RQPCR法檢測結(jié)果顯示10molLAMN107作用于細(xì)胞24h后，K562A02HO1組，K562A02LXSN組，K562A02組，

5、未加藥K562A02HO1組及未加藥K562A02組BCRABL融合基因拷貝數(shù)分別為(6.011060.13)、(8.971050.09)、(9.111050.15)、(7.371070.23)、(5.541060.22)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果示10molLAMN107作用24h后，轉(zhuǎn)基因組、空載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞、未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組、未加藥轉(zhuǎn)基因組、未加藥細(xì)胞組細(xì)胞凋亡率基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(307602