雷公藤甲素通過抑制逆轉錄病毒HERV-K Np9基因轉錄誘導人K562和Jurkat白血病細胞凋亡.pdf

1、目的:
　　1、明確HERV-K Np9病毒基因在白血病細胞系和原代白血病細胞中的轉錄水平。
　　2、探討雷公藤甲素(TPL)對人K562和Jurkat白血病細胞HERV-K Np9基因轉錄及其下游信號分子影響。
　　3、探討雷公藤甲素誘導K562和Jurkat白血病細胞凋亡與其抑制Np9轉錄相關性。
　　方法:
　　1、以(0.5-64nmol/L)濃度雷公藤甲素(TPL)分別處理Jurkat, K562

2、，K562/ADR，Raji，NB4，KM3，CML-BC，KU812，KG-1，THP-1，Kasumi-1，KCL-22細胞72h和臨床白血病病人樣本48h，然后用MTT法檢測細胞存活率并計算出相應的半數(shù)增殖抑制濃度(IC50)值。
　　2、半定量RT-PCR檢測12種血液腫瘤細胞系和臨床樣本中HERV-K Np9的表達情況。
　　3、按照0，2，4，8，16nmol/L濃度雷公藤甲素處理Jurkat和K562細胞48h

3、，流式細胞儀檢測它們凋亡細胞的變化。
　　4、半定量RT-PCR檢測加雷公藤甲素處理Jurkat和K562細胞以及原代病人樣本后，各組Np9基因mRNA的表達水平變化，并用Kodak1D3.6軟件進行定量分析。
　　5、采用統(tǒng)計軟件SPSS19.0分析雷公藤甲素對Np9基因轉錄抑制與細胞凋亡之間的相關性。
　　6、應用Western blot檢測加雷公藤甲素后Jurakt和K562細胞中Np9下游信號分子c-myc，β

4、-catenin，p-ERK，p-Akt和Notch1蛋白水平的變化情況。
　　7、應用Western blot檢測經(jīng)雷公藤甲素處理后Jurakt和K562細胞中凋亡相關分子PARP，caspase-3表達水平變化
　　結果:
　　1、雷公藤甲素呈劑量依賴方式抑制Jurkat，K562，K562/ADR，Raji，NB4，KM3，CML-BC，KU812，KG-1，THP-1，Kasumi-1和KCL-2212種血液系

5、統(tǒng)腫瘤細胞的增殖，其半數(shù)增殖抑制濃度(IC50)在1.4 nmol/L到27.1 nmol/L之間。雷公藤甲素對于5例臨床白血病病人樣本原代白血病細胞也有明顯的增殖抑制作用，其半數(shù)增殖抑制濃度(IC50)在9.13-29.2nmol/L之間。
　　2、在12種血液系統(tǒng)腫瘤細胞系中，Jurkat，K562，K562/ADR, KM3細胞和臨床樣本中高表達Np9基因mRNA。
　　3、雷公藤甲素能顯著誘導Jurkat和K562細

6、胞凋亡，并呈劑量依賴性。
　　4、雷公藤甲素處理Jurakt和K562細胞后，Np9轉錄水平隨著雷公藤甲素作用濃度的增高而下降。雷公藤甲素也下調臨床病人樣本中Np9轉錄水平。
　　5、經(jīng)統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素對白血病細胞Np9基因轉錄抑制水平與其誘導的細胞凋亡之間具有顯著相關性。其中Jurkat細胞R2=0.907，K562細胞R2=0.987。兩組p值均＜0.05。
　　6、雷公藤甲素抑制白血病細胞Np9基因轉錄水平

7、的同時，平行下調其下游與白血病細胞增殖相關的信號分子c-myc，β-catenin，p-ERK, p-AKT和Notch1的蛋白水平。
　　7、雷公藤甲素呈劑量依賴方式誘導Jurkat和K562細胞活化的PARP和活化的caspase-3表達上升。
　　結論:
　　1、雷公藤甲素呈劑量依賴方式抑制多種血液腫瘤細胞系和原代白血病細胞的增殖。
　　2、HERV-K Np9基因mRNA在一些白血病細胞系和原代白血病細胞

8、樣本中呈高表達狀態(tài)。
　　3、雷公藤甲素抑制白血病細胞Np9基因轉錄與其誘導細胞凋亡之間具有顯著相關性，提示抑制Np9轉錄可能是雷公藤甲素誘導Jurkat和K562細胞凋亡的重要分子機制之一。
　　4、雷公藤甲素抑制白血病細胞Np9基因轉錄同時，平行下調其下游多個與白血病細胞增殖相關的信號分子，如c-myc，β-catenin，p-ERK，p-Akt和Notch1蛋白。
　　5、HERV-K Np9可能是一個新的白血病