腦出血大鼠腦組織、血漿MDA、NF-κB、TNF-α含量變化及依達拉奉的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、背景與目的 腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是指原發(fā)性腦實質(zhì)內(nèi)出血，發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高，嚴重威脅人類的生命和健康。腦出血后血腫周圍組織水腫和神經(jīng)元損傷是影響腦出血患者病情程度及預(yù)后的重要因素。然而目前對腦出血尚無確切有效的治療方法。其主要原因是對其病理生理機制認識尚不完全清楚。研究發(fā)現(xiàn)腦出血后血腫周圍也存在一個類似于缺血性腦卒中的“半暗帶”組織，“半暗帶”組織中存在著復(fù)雜的病理生理變化

2、，這種變化是多重因素共同參與的復(fù)雜的過程。進一步研究腦出血后血腫周圍組織的病理生理機制并進行干預(yù)，對減少患者的功能損害、改善臨床預(yù)后有重要意義。自由基及其相關(guān)的炎性機制在這些損害中的作用愈來愈受到重視。自由基清除劑MCI-186(3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，依達拉奉)作為新開發(fā)的一種抗氧化劑已廣泛用于治療急性腦梗死，療效顯著。但其對出血性腦損傷是否具有治療作用尚不清楚。本研究通過觀察自由基和炎性反應(yīng)在腦出血后腦損傷中的作用，

3、以及依達拉奉對腦出血是否具有治療效果，探討其可能的機制，為腦出血后腦損傷的病理生理機制研究及臨床治療提供理論依據(jù)。 材料和方法 1．實驗動物分組：Sprague-Dawley實驗大鼠120只，雌雄各半，按照隨機數(shù)字表法分為對照組(control group)、腦出血組(ICH group)和治療組(Therapy group)，每組40只。每組按不同的時相點又分為4個亞組，每個亞組10只。其中5只用于腦含水量和病理學(xué)檢測

4、，另外5只用于MDA、TNF-α、NF-кB檢測。各組大鼠在取腦前從下腔靜脈采集血標本，檢測血漿中相應(yīng)的指標。 2．ICH動物模型：采用立體定向自體血注入法。沿正中線切開頭部皮膚，暴露顱骨和Bregma點(前囟)。于前囟前0.2mm，中線右側(cè)旁開3mm處垂直進針6mm到達尾狀核，分兩次注入50ul自體血。 3.對照組大鼠操作步驟同ICH組，但不注血。治療組大鼠分別于造模前30min及造模后1次/12h腹腔注射依達拉奉(3

5、mg/Kg)；ICH組和對照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。 4．神經(jīng)功能缺損評分：參照Longa(1989)標準。 5．腦含水量檢測：采用干濕重法。計算公式：腦含水量=(濕重-干重)/濕重×100％。 6．MDA檢測：采用硫代巴比妥酸法，單位：nmol/mgprot。 7．TNF-α檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法，單位：ng/ml。 8．NF-кB檢測：采用電泳遷移率變動分析(EMSA)

6、法，單位：DU。 9．病理學(xué)分析：采用蘇木精-伊紅染色(HE)，光鏡下觀察。 10．統(tǒng)計學(xué)分析：應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析及相關(guān)檢驗。 結(jié)果 1．神經(jīng)功能缺損評分：腦出血組大鼠各時相點神經(jīng)功能缺損評分明顯高于對照組；治療組大鼠各時相點神經(jīng)功能缺損評分均顯著低于腦出血組(P<0.05)。 2．腦含水量檢測：腦出血組大鼠6h、24h、72h腦含水量較對照組顯著增高(P<0.05)

7、，168h差異不顯著(P>0.05)；與腦出血組相比，治療組大鼠6h、24h、72h腦含水量顯著降低(P<0.05)，168h差異不顯著(P>0.05)。 3．腦勻漿MDA、TNF-α含量檢測：腦出血組大鼠各個時相點腦勻漿 MDA、TNF-α含量較對照組顯著升高(P<0.05)；與腦出血組相比，治療組大鼠腦勻漿MDA、TNF-α含量顯著降低(P<0.05)。 4．相關(guān)性檢驗結(jié)果：腦出血組和治療組大鼠腦含水量與腦勻漿TNF

8、-α含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R<'2>=0.934，p<0.01。 5．腦組織NF-кB活性檢測：腦出血組大鼠各個時相點腦組織NF-кB活性較對照組非常顯著增高(p<0.01)；與腦出血組相比，治療組大鼠各個時相點腦組織NF-кB活性非常顯著降低(p<0.01)。 6．血漿MDA、TNF-α含量檢測：腦出血組各個時相點血漿MDA、TNF-α含量較對照組均非常顯著增高(p<0.01)；與腦出血組相比，治療組大鼠血漿MDA

9、、TNF-α含量非常顯著降低(P<0.01)。 7．腦組織病理變化：HE染色光鏡下見腦出血組大鼠血腫周圍組織炎性細胞浸潤及水腫情況比對照組均嚴重；與腦出血組相比，治療組大鼠上述情況明顯緩解。 結(jié)論 1．腦出血后自由基的大量產(chǎn)生、TNF-α的過量釋放與血腫周圍組織水腫、神經(jīng)元損傷病生機制密切相關(guān)。 2．腦出血后自由基大量產(chǎn)生，可進一步導(dǎo)致NF-кB活化，其下游的TNF-α過量釋放。證實腦出血大鼠炎性機制與自