聯(lián)合運(yùn)用PEG3啟動(dòng)子和sTRAIL基因?qū)θ藧盒曰チ鲆种谱饔玫某醪窖芯?pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文聯(lián)合運(yùn)用PEG3啟動(dòng)子和sTRAIL基因?qū)θ藧盒曰チ鲆种谱饔玫某醪窖芯啃彰菏Y祥龍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生殖工程指導(dǎo)教師：盧光琇20080501博士學(xué)位論文中文摘要研究表明，PEG3啟動(dòng)子在大多腫瘤細(xì)胞系中活性高，而在正常的組織細(xì)胞中活性低或檢測(cè)不到，我們的研究表明，PEG3啟動(dòng)子在胚胎干細(xì)胞中的活性極低，因此，PEG3啟動(dòng)子可能是作為腫瘤基因治療，特別是腫瘤干細(xì)胞基因治療的理想啟動(dòng)子，可能在腫瘤基因治療過(guò)程中有

2、效地解決腫瘤抑制基因的靶向問(wèn)題。在本課題中，我們用PEG3啟動(dòng)子替換腺相關(guān)病毒中的CMV啟動(dòng)子，構(gòu)建了治療性載體AAV—PEG—sTRAIL，將sTRAIL基因轉(zhuǎn)入NTERA一2細(xì)胞中，流式細(xì)胞儀檢測(cè)到23123％早期凋亡細(xì)胞；熒光顯微鏡下可觀察到Hoechst33258染色濃縮的細(xì)胞核，細(xì)胞中期凋亡的標(biāo)志。熒光定量PCR檢測(cè)sTRAIL的四個(gè)配體，誘導(dǎo)配體l(DcRI)、誘導(dǎo)配體2(DcR2)、死亡受體(DR4)和死亡受體(DR5)，

3、結(jié)果表明DcRI、DcR2表達(dá)量變化極小，但DR4和DR5有3倍以上表達(dá)量上升，Westernblot檢測(cè)了Caspase3蛋白表達(dá)量，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染sTRAIL基因的NTERA一2細(xì)胞可檢測(cè)到19KD分離的Caspase一3，表明sTRAIL基因已經(jīng)引起了NTERA一2細(xì)胞凋亡，轉(zhuǎn)染sTRAIL基因與未轉(zhuǎn)染sTRAIL基因的細(xì)胞致瘤研究表明，轉(zhuǎn)染組4只NOD—SCID小鼠，60天僅一只小鼠致瘤，致瘤率為25％，而未轉(zhuǎn)染組4只NOD—S