STGC3基因啟動(dòng)子的初步分析及鑒定.pdf

1、目的：利用生物信息學(xué)及報(bào)告基因載體分析方法對(duì)STGC3基因啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行預(yù)測(cè)及活性檢測(cè)，初步鑒定 STGC3基因的啟動(dòng)子區(qū)域，為闡明 STGC3基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供重要的依據(jù)。
　　方法：根據(jù) STGC3基因的前期研究結(jié)果，利用多種生物信息學(xué)軟件對(duì)STGC3基因5’端上游調(diào)控區(qū)－3046bp至－46bp區(qū)域的3000bp序列進(jìn)行啟動(dòng)子預(yù)測(cè)，把預(yù)測(cè)和分析得到的STGC3基因可能的啟動(dòng)子片段構(gòu)建至螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因pGL3-enh

2、ance載體上，然后將重組體轉(zhuǎn)染到人胚腎上皮細(xì)胞系293T、人鼻咽癌細(xì)胞系CNE2及永生化人鼻咽上皮細(xì)胞系NP69，并利用雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)重組質(zhì)粒的活性以初步鑒定STGC3基因的啟動(dòng)子區(qū)域。
　　結(jié)果：生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示－3046bp至－46bp區(qū)域的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)有兩個(gè)，一個(gè)在－2348bp處，另一個(gè)在－948bp處，而且此區(qū)域存在兩個(gè)CpG島，CpG島1位于－1805bp至－1705bp處，長(zhǎng)度為101bp; CpG

3、島2位于－900bp至－684bp處，長(zhǎng)度為217bp。該區(qū)域未檢測(cè)到經(jīng)典的TATA盒序列，－1140bp和－774bp處有GC盒信號(hào)，－441bp處有CAAT盒信號(hào)。STGC3基因啟動(dòng)子區(qū)分值0.8以上的區(qū)域位于－2992bp至－69bp，且－845bp至－795bp區(qū)域啟動(dòng)子分值最高達(dá)到1.0。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示pGL3-en283、pGL3-en281、 pGL3-en571質(zhì)粒在NP69、293T和CNE2三種細(xì)胞中相對(duì)于

4、陰性對(duì)照pGL3-enhance質(zhì)粒均有較強(qiáng)的啟動(dòng)子活性，其中 pGL3-en281質(zhì)粒在三種細(xì)胞中的啟動(dòng)子活性最強(qiáng)，故－934bp至－653bp區(qū)域有可能是其核心啟動(dòng)子區(qū)，而且可能在－653bp至＋72bp的DNA序列中含有負(fù)性調(diào)控元件，而三種質(zhì)粒在293T細(xì)胞中比其在CNE2細(xì)胞中的啟動(dòng)子活性強(qiáng)，可能在CNE2細(xì)胞中存在影響啟動(dòng)子活性的因素。
　　結(jié)論：
　?。?）STGC3基因啟動(dòng)子區(qū)位于－2992bp至－69bp區(qū)域