內(nèi)皮抑素對小兒惡性畸胎瘤裸鼠模型的影響.pdf

1、目的： 通過復(fù)制小兒惡性畸胎瘤裸鼠模型，了解內(nèi)皮抑素(endostatin，ES)對小兒惡性畸胎瘤的抑制作用，并探討其作用機(jī)制。 方法： 1.實驗動物：4周齡BALB/c裸鼠40只，雌雄各半(購自中科院上海實驗動物中心，飼養(yǎng)于SPF級實驗室)；小兒卵黃囊瘤荷瘤裸鼠(溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二/育英兒童醫(yī)院小兒外科培養(yǎng)，飼養(yǎng)于SPF級實驗室)。2.動物實驗：取小兒卵黃囊瘤荷瘤裸鼠移植瘤組織，接種于4周齡BALB/c裸鼠，復(fù)

2、制小兒惡性畸胎瘤裸鼠模型，分為四組，每組雌雄各5只：(1)內(nèi)皮抑素高劑量組：皮下及瘤內(nèi)注射ES1.5mg(kg·d)-1，連續(xù)給藥14天；(2)內(nèi)皮抑素低劑量組：皮下及瘤內(nèi)注射ES0.75mg(kg·d)-1，連續(xù)給藥14天；(3)實驗對照組：皮下及瘤內(nèi)注射生理鹽水25ml(kg·d)-1，(4)空白對照組：不予藥物干預(yù)。3.指標(biāo)測定：(1)每日測量移植瘤體積，計算腫瘤抑制率，繪制生長曲線；(2)藥物干預(yù)結(jié)束后，取各組雄性裸鼠，明膠-氧

3、化鉛懸濁液灌注法行腫瘤血管造影，觀察腫瘤血管差異；(3)藥物干預(yù)結(jié)束后，各組雌性裸鼠處死、取瘤，常規(guī)4％多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，5um連續(xù)切片，HE染色觀察腫瘤形態(tài)學(xué)差異；(4)免疫組化方法檢測移植瘤AFP、VE6F、flk-1、MVD。 結(jié)果： 1.小兒惡性畸胎瘤裸鼠模型復(fù)制成功，腫瘤性質(zhì)穩(wěn)定。2.腫瘤體積：第1天及第3天測量結(jié)果，各組間腫瘤體積均無明顯差異(P>0.05)；自第6天測量ES治療組腫瘤生長速度明顯低

4、于對照組(P<0.05)；第12天測量結(jié)果提示高劑量組與低劑量組腫瘤體積出現(xiàn)顯著差異(P<0.01)，實驗對照組與空白對照組各時間點腫瘤體積測量結(jié)果均無差異(P>0.05)。腫瘤抑制率：高劑量組腫瘤抑制率隨時間推移呈上升趨勢，最高達(dá)49％，低劑量組腫瘤抑制率不穩(wěn)定，最高達(dá)31％，高劑量組與低劑量組之間存在差異(P<0.05)，各時間段腫瘤抑制率存在差異(P<0.05)。3.腫瘤血管造影：血管分布密度：內(nèi)皮抑素高劑量治療組<低劑量組<實驗

5、對照組≈空白對照組；腫瘤周邊部位正常血管，各組間并未見明顯差別；面積比率各組之間存在顯著差異(F=12.989，P<0.01)，兩治療組之間存在差異(P<0.05)，兩對照組之間無明顯差異(P>0.05)。4.HE染色：高劑量組腫瘤中央?yún)^(qū)可見大范圍壞死灶，壞死灶單一、范圍大；低劑量組腫瘤壞死灶與高劑量組相似，部分組織切片可見腫瘤組織中央壞死空腔。實驗對照組及空白對照組腫瘤組織內(nèi)壞死灶散在分布，多面積較小，部分壞死灶相互融合形成較大壞死灶

6、，部分腫瘤組織可見壞死空腔形成。5.免疫組化：AFP在移植瘤細(xì)胞胞漿中有表達(dá)；VEGF、flk-1的表達(dá)范圍及強(qiáng)度，治療組均小于對照組(P<0.05或P<0.01)，高劑量組小于低劑量組(P<0.05或P<0.01)，兩對照組之間無明顯差異(P>0.05)；MVD：治療組均小于對照組(P<0.01)，高劑量組小于低劑量組(P<0.01)，兩對照組之間無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1.小兒惡性畸胎瘤裸鼠模型復(fù)制成功