生姜對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用與機(jī)理研究.pdf

1、目的： 1.采用公認(rèn)的大鼠局灶性腦缺血模型和可靠的觀察指標(biāo)，研究生姜對(duì)腦缺血確切的治療作用。 2.研究和比較生姜不同提取物對(duì)腦缺血的治療作用，根據(jù)量效關(guān)系，尋找各提取物的有效劑量，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。 3.根據(jù)腦缺血再灌注損傷的病理生理機(jī)制，采用全腦缺血再灌注和局灶性腦缺血再灌注兩種動(dòng)物模型，通過對(duì)腦組織能量代謝、Ca<'2+>含量、氧化應(yīng)激、氨基酸遞質(zhì)、細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)，研究生姜水提物對(duì)腦缺血再灌

2、注損傷的保護(hù)作用機(jī)制。 4.根據(jù)缺血性腦血管病后遺癥常伴有認(rèn)知功能障礙的特點(diǎn)，采用結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)缺血再灌注的方造成腦缺血認(rèn)知功能障礙模型，通過對(duì)空間學(xué)習(xí)記憶能力、中樞膽堿能神經(jīng)功能和氧化應(yīng)激等指標(biāo)的測(cè)定，研究生姜對(duì)腦缺血后遺癥認(rèn)知功能障礙的改善作用及可能的作用機(jī)理。 方法： 1.SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、川芎嗪組、生姜汁高劑量組、中劑量組和低劑量組，開顱直接阻斷大鼠一側(cè)大腦中動(dòng)脈造成局灶

3、性腦缺血模型(MCAO)，灌胃給藥5天，積分法測(cè)定MCAO大鼠神經(jīng)病學(xué)癥狀等級(jí)，避暗法測(cè)定被動(dòng)性條件反射潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)，氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法測(cè)定大腦梗死面積。 2.昆明種小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、尼莫地平組和揮發(fā)油、乙醇提取物、水提取物、混合物各三個(gè)劑量組，共15組。灌胃給藥3天，采用結(jié)扎小鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)缺血再灌注模型(CIR)，干濕重法測(cè)定腦組織含水量，化學(xué)比色法測(cè)定腦組織Na<'+>，K<'+>-A

4、TP酶、Ca<'2+>-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。 3.SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、尼莫地平組、生姜水提物高劑量組、中劑量組和低劑量組，采用Pdsinelli's四動(dòng)脈阻斷法造成大鼠全腦缺血再灌注損傷模型(CIR)，分別于手術(shù)前1日、術(shù)前1h和再灌注前30min灌胃給藥，共3次。全自動(dòng)凝血分析儀測(cè)定血漿凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)和纖維蛋白原

5、含量(FIB)，干濕重法測(cè)定腦組織含水量，高效液相色譜法測(cè)定腦組織谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)含量，原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定腦組織Na<'+>、K<'+>、Ca<'2+>含量，光化學(xué)比色法測(cè)定腦組織Na<'+>，K<'+>-ATP酶、Ca<'2+>-ATP酶、SOD活性和MDA含量。 4.SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、尼莫地平組、生姜水提物高劑量組、中劑量組和低劑量組。采用線拴法造成大鼠局灶性

6、腦缺血再灌注損傷模型，分別于手術(shù)前24h、術(shù)前1h和再灌注后12h灌胃給藥，共3次。末端脫氧核糖核酸介導(dǎo)生物素化脫氧尿嘧啶缺口末端標(biāo)記(TUNEL)法測(cè)定大腦皮層和海馬凋亡神經(jīng)元，免疫組織化學(xué)方法研究大腦皮層和海馬神經(jīng)元capase-3、bcl-2和bax基因表達(dá)，HE染色觀察大腦皮層和海馬組織病理形態(tài)學(xué)改變。 5.SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、石杉?jí)A甲組、生姜水提物高劑量組、中劑量組和低劑量組。采用反復(fù)結(jié)扎與開放雙

7、側(cè)頸總動(dòng)脈的方法復(fù)制大鼠腦缺血再灌注認(rèn)知功能障礙模型，術(shù)后第15天灌胃給藥，每天1次，連續(xù)20天。采用morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力，光化學(xué)比色法測(cè)定大腦皮層和紋狀體乙酰膽堿酯酶(AchE)活性、SOD活性和MDA含量。 結(jié)論： 1.生姜及其揮發(fā)油、水提物和醇提物對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血及缺血再灌注腦損傷具有明顯的保護(hù)作用。 2.生姜水提物可通過阻滯細(xì)胞內(nèi)鈣超載、減輕興奮性氨基酸神經(jīng)毒性